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尼康显微镜荧光蛋白组合滤光片的选择

2015-05-15  发布者:admin 

设计成图像的荧光蛋白的荧光滤光片组合,必须仔细选择,以最大限度地提高发光强度的呈现给检测器,同时减少了从自体荧光或放气通过其它荧光团不希望的光子数的水平。 大多数荧光蛋白表现出宽的吸收和发射光谱图提供广泛的选择在过滤器,其通常与特定的检测系统(人眼,数码相机,或光电倍增管)的使用进行了优化。 这个交互式教程旨在使临界滤波器参数,包括中心波长,带宽区域的识别,以及二色镜截止波长,这是必要的成象荧光蛋白质。


教程初始化与增强型绿色荧光蛋白(EGFP)出现在光谱曲线窗口叠加在一个汞弧光放电灯的发射光谱的归一化的吸收和荧光发射光谱图。 还包括在初始化时该窗口是切割的二色镜(分束器)的信息的波长适合于荧光团,以及用于激发滤波带宽发射滤波器带宽型材建议起点。 鼠标光标可用于拖动沿着谱概况窗口的波长轴灰度带宽的边界来确定最佳位置。 上为每个滤波器的控制的右手侧的双滑块组合或箭头按钮可以用来调整带宽,中心波长可以使用左手箭头按钮来改变。 拖动左侧滚动条也意味着整个图形带宽轮廓,同时拖动右侧滑块将增加或减少带宽大小。 目前中心波长和带宽的虚拟激发和发射滤光片被不断更新和在红色标号上述滑块显示。奥林巴斯显微镜

二色镜滑块控制该元件的截止波长曲线的位置,并且可以打开或关闭使用相邻滑块的复选框进行切换。 激发和发射滤波器带宽显示器也可以通过除去复选标记禁用。 同样地,在水银灯的光谱轮廓可以通过停用所附复选框被关闭。 默认汞弧灯)吸收抗体 (Ab)和发射器(EM)光谱曲线可以通过从上方的照明源头黄色显示窗的框删除复选标记被禁用。 当激光源从照明下拉菜单选择,基于在激光波长处的摩尔消光系数的激励效率百分比显示在照明显示窗口上方的绿色框。 激光线,绘制颜色近似的光谱概要窗口的波长,可以通过禁用所述激光线复选框被停用。 为了保持当前的教程的参数(显示激发和发射滤光器配置文件等),同时,通过探针或照明源列表切换,在维护状态复选框可以启用。 新的荧光蛋白类可以使用组单选按钮的光谱曲线窗口的右侧可以选择一起选择一个探头下拉菜单。

荧光蛋白过滤组合属性

蛋白质
  (
缩写)

激发激光
  (nm)

激发滤光片
  CWL / BW (nm)

二色镜
  Cut-On (nm)

发射滤光片
  CWL / BW (nm)

相对亮度
  (% of EGFP)


GFP (wt)

Argon (488)

450/50

480LP

510/50

48


绿色荧光蛋白

EGFP

Argon (488)

470/40

495LP

515/30

100


Emerald

Argon (488)

470/40

495LP

515/30

116


Azami Green

Argon (488)

470/40

495LP

520/30

121


CopGFP

Argon (488)

470/40

490LP

510/30

125


AcGFP

Argon (488)

470/40

490LP

510/30

82


ZsGreen

Argon (488)

470/30

495LP

520/40

117


蓝色荧光蛋白

EBFP

Diode (405)

375/50

405LP

445/50

27


Sapphire

Diode (405)

400/50

460LP

515/50

55


T-Sapphire

Diode (405)

400/50

460LP

515/50

79


青色荧光蛋白

AmCyan1

Argon (457)

440/40

470LP

500/40

31


ECFP

Diode (440)

435/40

460LP

495/50

39


Cerulean

Diode (440)

435/40

460LP

500/50

79


CoralHue Cyan

Argon (488)

450/50

480LP

505/35

73


黄色荧光蛋白

EYFP

Argon (514)

490/40

515LP

540/30

151


PhiYFP

Argon (514)

500/45

525LP

555/40

155


Citrine

Argon (514)

500/25

515LP

545/40

174


Venus

Argon (514)

495/35

515LP

545/40

156


ZsYellow1

He-Ne (543)

500/45

525LP

555/40

25


橙色和红色荧光蛋白

CoralHue Orange

He-Ne (543)

525/40

550LP

580/40

92


mOrange

He-Ne (543)

525/40

550LP

585/50

146


DsRed

He-Ne (543)

540/45

570LP

600/50

176


DsRed2

He-Ne (543)

540/50

570LP

600/40

72


DsRed-Express

He-Ne (543)

540/45

570LP

600/50

58


mTangerine

Kr-Ar (568)

545/40

570LP

600/40

34


mStrawberry

Kr-Ar (568)

550/50

580LP

615/50

78


AsRed2

Kr-Ar (568)

540/40

575LP

620/60

8


mRFP1

He-Ne (594)

560/55

590LP

630/60

37


mCherry

He-Ne (594)

560/55

590LP

630/60

47


HcRed1

He-Ne (594)

560/60

595LP

630/50

1


mRaspberry

He-Ne (594)

570/60

605LP

645/60

38


HcRed-Tandem

He-Ne (594)

570/70

610LP

650/60

19


mPlum

He-Ne (594)

570/60

605LP

650/60

12


光学荧光笔荧光蛋白; (N) = Native (P) = Photoconverted

PA-GFP (N)

Diode (405)

400/60

465LP

530/50

8


PA-GFP (P)

Argon (488)

480/40

505LP

535/40

41


PS-CFP (N)

Diode (405)

395/50

430LP

470/60

16


PS-CFP (P)

Argon (488)

470/50

500LP

530/40

15


PS-CFP2 (N)

Diode (405)

395/50

430LP

470/60

26


PS-CFP2 (P)

Argon (488)

470/50

500LP

530/40

32


Kaede (N)

Argon (488)

485/40

510LP

535/30

259


Kaede (P)

Kr-Ar (568)

540/50

570LP

590/30

59


mEosFP (N)

Argon (488)

490/30

510LP

535/30

128


mEosFP (P)

Kr-Ar (568)

540/50

570LP

600/40

68


Kindling (N/P)

Kr-Ar (568)

560/50

590LP

625/50

12


Dronpa (P)

Argon (488)

485/30

505LP

530/30

240


表1


表1是由几个最流行和可能有用的荧光蛋白变体的显示属性的汇编。 随着通用名称和/或缩写为每个荧光蛋白,最佳激光波长线,以及用于激发和发射滤波器带宽和中心波长建议起点被列出。 也包括在表中的相对亮度和推荐的二色镜的参数。 所计算的亮度值来源于摩尔消光系数和量子产率的产物,通过用EGFP的值除以。 该列表由科学和商业文献资源创建,不是为了全面,而是代表已经受到相当重视的文学和可能有助于研究工作的宝贵荧光蛋白的衍生物。

在计算本教程的值所使用的吸收和荧光光谱记录在受控条件下被归为比较只是和显示的目的。在实际荧光显微镜调查,光谱曲线可能会因环境的影响,如pH,离子浓度,溶剂的极性,以及在局部探针浓度的波动而变化,并且因此,可能不同于实验条件下实际观察到。