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尼康显微镜三频激发块DAPI-FITC-TRITC

2015-04-23  发布者:admin 

紫外线和尼康DAPI-FITC-TRITC滤波器组合可见光透射光谱曲线下面示于图1.该滤波器集合时在施加设计的DAPI,FITC(异硫氰酸荧光素),和TRITC(四甲基异硫氰酸酯)探针的最佳检测组合,并采用一个激发滤光器与窄带通窗中的紫外线(385至400纳米),蓝色(475〜490纳米),绿(545至565纳米)的频谱区。

三发射(阻挡)滤波器的带通区域允许检测的蓝,绿,和橙红色发射从最多同时3荧光染料透射和反射带的每一个过滤器,并应用具有选择为互补的发射和激发波长的多个带通透射区域一个二色镜之间的尖锐过渡,使三频带信号检测以最小的交叉,干扰和噪声。

三重激发滤波器模块DAPI-FITC-TRITC产品规格:

  • 激发波长筛选:385-400纳米(带通,393 CWL),475-490纳米(带通,483 CWL)和545-565纳米(带通,555 CWL)

  • 二色镜波长:435-470纳米(带通),500-540毫微米(带通),和570-645纳米(带通)

  • 屏障过滤波长:450-465纳米(带通,458 CWL),505-535纳米(带通,520 CWL)和580-620纳米(带通,600 CWL)

DAPI-FITC-TRITC三重带荧光滤波器组合被用于同时检测所述荧光染料DAPI,FITC和TRITC具有最小交叉的专门设计(光谱泄放通)相邻带之间,并且它也可以与荧光的其它组合采用具有类似的光谱曲线探针。 滤波器组的短波长信号的信道将选择狭义的光谱区为紫色激发和蓝色发光检测; 第二,波长较长的信道对应于蓝色激发绿色发光检测,以及绿色激发耦合到橙红色发射构成滤波器集合的第三频带。 短波长激发传输的大小,以提供蓝色发光的更好的平衡与其他荧光信号,同时也尽量减少漂白刻意降低。 研究从以下三组选择荧光团的各种组合时,此滤波器组建议:DAPI,蓝色荧光蛋白(BFP)或Hoechst 染料(紫色激发);FITC,绿色荧光蛋白(GFP),的Cy2,或Alexa Fluor 488(蓝色激发); TRITC,红色荧光蛋白,Cy3的,将Alexa Fluor 546,或美图跟踪红CMXRos(绿色激发)。 在图2中呈现的图像表明该过滤器设置有多种针对不同细胞内位置的荧光探针组合的性能。

图2(a)所示的荧光发射从沾有MitoTracker红CMXRos,将Alexa Fluor 488共轭鬼笔环肽和DAPI人骨肉瘤细胞(U-2线),其中针对细胞内的线粒体的网络,细胞骨架肌动蛋白丝的文化,核上。 的可见光最大吸收MitoTracker红CMXRos的是579纳米,并且最大发射发生在599纳米,而对于将Alexa Fluor 488的相应的值是495和519纳米。 注意在这四个子细胞,其清楚地表明通过高信号电平的所有三个用于染色的样品中的荧光团的存在显着的对称性。

大鼠的皮肤组织的一个薄的部分染色DNA和糖蛋白用DAPI和四甲基罗丹明(TMR)缀合到小麦胚芽凝集素,分别示于图2(b)。 紫外光吸收最大值的DAPI的是358纳米,并且在可见光发射最大值发生在461纳米,而对于TMR相应值是550和573纳米。 另外,将试样同时标记的Alexa Fluor 488缀合至鬼笔环肽(靶向肌动蛋白网络;绿色发光)。 注意两个重叠和离散信号的来自所有三个这些荧光团的存在。(奥林巴斯显微镜)

从牛肺动脉血管内皮细胞的培养物被认为免疫荧光标记的同随后山羊缀合BODIPY FL抗小鼠Fab片段初级抗牛的α-微管蛋白的小鼠单克隆抗体的荧光发射强度在图2(c)所示。 将细胞培养物同时沾上德克萨斯红鬼笔环肽和DAPI,靶向的细胞骨架肌动蛋白网络和DNA在细胞核中,分别。 可见光最大吸收的BODIPY FL的是505纳米,并且最大发射发生在513纳米,而对于德克萨斯红的相应值是595和620纳米。

精选于图2(d)是一个薄的小鼠肠沾上的Alexa Fluor 350麦胚凝集素,蓝色荧光的凝集素特定于杯状细胞的粘液部分。 另外,将试样同时沾上的Alexa Fluor 568鬼笔环肽(丝状肌动蛋白; 600纳米发射)和SYTOX绿(核; 504纳米激发和523纳米发射)。 注意信号从蓝色荧光团(Alexa Fluor 350)的存在下,以及作为核在组织标本由于SYTOX绿的明亮的绿色荧光,并且橙红色荧光(Alexa Fluor 568)从肌动蛋白丝在刷边框。

沾有MitoTracker红CMXRos和Alexa Fluor 488缀合鬼笔环肽正常人肺成纤维细胞(MRC-5线),其靶向细胞内的线粒体的网络和细胞骨架的肌动蛋白丝,分别示于图2(e)所示。 另外,将试样同时用DAPI染色(在细胞核靶向DNA;紫外线激发的蓝色发光)。 注意相对平衡,高信号电平的所有三个用于染色的样品中的荧光团的存在。

由薄麦粒的截面自发荧光发射强度( 小麦 )的组织中演示了图2(f)所示。 在植物组织中的内源性的自发荧光产生于各种生物分子,包括木质素,叶绿素,β-胡萝卜素,叶黄素和。 在蓝色和绿色的激发区域,叶绿素具有吸收带,具有高消光系数,并产生一个显著量荧光在与450和550纳米之间的波长激发。 其他的内源性荧光团通过紫外线与该过滤器组合激发。 对于以上所示的麦粒组织,注意自发荧光发射强度中的蓝,绿,和红光谱区域的存在,这是尼康DAPI-FITC-TRITC荧光滤波器组合的特性。