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尼康显微镜蓝紫色激发块CFP(带通)

2015-04-18  发布者:admin 

高性能尼康CFP(青色荧光蛋白)滤波器的组合通过采用带通发射滤波器,其40纳米的通带(460-500纳米)限制检测到的荧光发射在不同于蓝紫组中的其他三个补青蓝光谱区域。 紫外,可见和近红外透射该滤波器组的频谱轮廓下面示于图1,一种窄的20纳米的激发最小化通带和自发荧光是为了避免通常用于双标记实验中使用的青色结合某些荧光染料的激发荧光蛋白。 虽然主要设计用于荧光蛋白的成像,此带通发射组合是用于获得具有多个标签标本图像时荧光团中的一个是有效地激发,在蓝紫色光谱区域是有用的。

蓝紫色激发滤光片座CFP规格:

  • 激发波长筛选:426-446纳米(带通,436 CWL)

  • 双色镜截止波长:455纳米(长通,LP)

  • 屏障过滤波长:460-500纳米(带通,480 CWL)

CFP荧光滤波器集合被设计以获得最佳性能与由蓝紫色波长激发青色荧光蛋白,特别是当用于在组合的双标记技术具有增强的黄色荧光蛋白利用。 虽然最初设计为从蛋白质的荧光团检测发射,该过滤器组合实质上是一种带通发射蓝紫激发集,并且可以被用于检查一个宽的吸收光在此光谱区域的标本光谱。

CFP组合的激发带通一般不激发黄色荧光蛋白(激发在513纳米),并通过采用带通发射滤波器,黄色荧光被排除的检测时在CFP滤波器集合被使用。 应当指出的是,从增强型绿色荧光蛋白的一些信号可能与此滤波器集合检测到,并且因此该荧光是不是一个好的候选为与青色蛋白质变体的双标记。 在滤波CFP组合建议研究以下荧光团时:ACMA,吖啶同型二聚体,Astrazon黄色,Atabrine,儿茶酚胺,CFP,色霉素A,Genacryl嫩黄,Genacryl黄色,塞夫龙河黄色,SYTO 42(43,44,45),和SYTOX蓝色。 在图2中呈现的图像表明该过滤器组合的性能与各种定位于不同的细胞内位置蓝紫吸收荧光探针。

示于图2(a)是从大鼠胸主动脉(肌肉)的细胞进行免疫荧光标记的同随后缀合的山羊抗小鼠Fab片段初级抗OXPHOS复合V抑制蛋白的单克隆抗体(小鼠)的培养的荧光发射强度太平洋蓝。 最大吸收太平洋蓝的是410纳米,并且最大发射发生在455纳米。 另外,将试样同时染色缀合鬼笔环肽F-肌动蛋白的Alexa Fluor 488(绿色),以及用于DNA与SYTOX橙。 注意没有信号的同时从橙色和绿色荧光团(SYTOX定位于细胞核会出现这些观察条件下绿色)。 在许多情况下,SYTOX橙染色多种除了DNA的细胞质的元素,尽管这不是显而易见的图像中。奥林巴斯显微镜

图2(b)展示了从大鼠骨骼肌组织细胞(L6细胞系;成肌细胞)的培养荧光发射该被免疫荧光标记与缀合到Alexa的初级抗牛的α-微管蛋白的小鼠单克隆抗体,随后用山羊抗小鼠Fab片段氟430.最大吸收的Alexa Fluor 430的是431纳米,并且最大发射发生在541纳米。 虽然细胞内微管网络使用这个协议重染色,在CFP组合带通滤波器不通过大量的荧光发射的来自的Alexa Fluor 430,并产生只有微弱的信号被集中靠近核。 另外,将试样同时染色F-肌动蛋白的Alexa Fluor 488缀合鬼笔环肽,以及用于线粒体与MitoTracker红CMXRos。 注意没有信号从红色(MitoTracker)和绿色(Alexa Fluor 488)的荧光团。

从DAPI染色,它的目标在细胞核DNA牛肺动脉内皮细胞培养荧光发射强度,是在图2(c)所示。 最大吸收的DAPI(4',6-二脒基-2-苯基吲哚)为358纳米,并且当荧光被绑定到DNA中的最大发射发生在461纳米。 另外,将试样同时沾上BODIPY FL phallacidin(靶向肌动蛋白;绿色发光)和MitoTracker红CMXRos(靶向线粒体;红色发光)。 注意没有信号从红色(MitoTracker)荧光团,但渗出通过从绿色(BODIPY FL)探针,其显示为围绕原子核的弱青色信号。 此外,核出现那么激烈,用荧光发射移位到较长波长比可比的图像与尼康紫罗兰和紫外线滤光片组合。

原子核中的小鼠肾薄组织切片(图2(d))的进行了针对性的核酸探针的DAPI,当在细胞培养物和组织切片结合到DNA,其具有最大激发在358纳米和发射最大值在461纳米。 此外,在图2(d)该低温恒温器部也同时沾上的Alexa Fluor 488麦胚凝集素(肾小球和曲小管)和Alexa Fluor 568鬼笔环肽(丝状肌动蛋白和刷状缘)。 注意没有信号从红色(的Alexa Fluor 568)的荧光团,但显著量渗透入来自绿色(的Alexa Fluor 488)探针青色发射滤光片。 用紫外线激发带通发射滤光片组,在试样的暗核会出现明亮的蓝色和的Alexa Fluor 488信号将基本上不存在。

图2(e)表示从大鼠袋鼠肾上皮细胞(PTK2线路)进行免疫荧光标记与初级抗细胞角蛋白(一种中间丝蛋白)的小鼠单克隆抗体的培养,随后用缀合的山羊抗小鼠Fab片段的发光强度滨海蓝色。 最大吸收码头蓝的是365纳米,并且最大发射发生在460纳米。 另外,将试样同时染色线粒体与MitoTracker红CMXRos。 注意没有信号从红色荧光团与该带通发射滤波器的组合。 还应当指出,在与在CFP滤波器集合较弱信号的缺乏,在蓝紫色区域的结果显著吸收匡蓝的。

由薄蕨类球果部分自发荧光发射强度( 全缘贯众 )组织表现出如图2(f)所示。 在植物组织中的内源性的自发荧光产生于各种生物分子,包括木质素,叶绿素,β-胡萝卜素,叶黄素和。在蓝紫色区域中,叶绿素具有吸收带,具有高消光系数,并产生一个显著量荧光在与400和440纳米之间的波长激发。 注意没有光谱渗出通过从自体荧光发射在绿色和红色光谱区域与CFP滤波器组合。