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尼康显微镜双频激发块FITC-TRITC

2015-04-14  发布者:admin 

紫外线和尼康双波段激发和发射的FITC-TRITC滤波器组合可见光透射光谱曲线下面示于图1.该过滤器组被设计用于传统的异硫氰酸荧光素的最佳检测素(FITC)及四甲基罗丹明异硫氰酸酯(TRITC)探针组合,以及其它荧光团具有类似的吸收光谱和发射光谱。 双激发干涉滤波器集成了一个激发滤光器具有窄通带的窗口,在蓝(475至490纳米),绿色(540至565纳米)的频谱区。 双发射(屏障)滤波器的带通区域能够同时从两个荧光检测的绿色和橙红色的发射。 传输和每个过滤器的反射带,并且应用具有选择为互补的发射和激发波长的两个带通透射区域(多色)一个二色镜之间的尖锐过渡,允许双波段信号检测以最小的干扰。

双激发滤波器模块FITC-TRITC产品规格:

  • 激发波长筛选:475-490纳米(带通,483 CWL)和540-565纳米(带通,553 CWL)

  • 多色镜波长:500-540纳米(带通)和575-660纳米(带通)

  • 屏障过滤波长:503-530纳米(带通,517 CWL)和580-620纳米(带通,600 CWL)

FITC-TRITC双波段荧光滤波器组合被用于同时检测的荧光染料FITC和TRITC与频带之间的最小串扰的专门设计的,并且可以与其他对具有相似光谱分布的荧光探针的使用。 当试样被照亮用水银弧光放电灯中,546纳米线是理想的TRITC激发。 过滤器设置的较短波长信道将选择狭义的光谱区域为蓝色激发和绿色发光检测,而较长的波长成分对应绿色激发和橙红色发光检测。 研究以下的荧光团的各种组合时,此滤波器组建议:FITC,绿色荧光蛋白(GFPEGFP),的Cy2,或的Alexa Fluor 488(蓝色激发),配对TRITC,Cy3的红色荧光蛋白(DsRed ),或的Alexa Fluor 546和568(绿色激发)。 在图2中呈现的图像表明具有多种针对不同细胞内位置的荧光探针对这个滤波器组合的性能。

如图2(a)是从染色的MitoTracker红CMXRos和BODIPY FL phallacidin牛肺动脉血管内皮细胞,其靶向细胞内的线粒体的网络和细胞骨架的肌动蛋白丝,分别培养的荧光发射强度。 最大吸收MitoTracker红CMXRos的是579纳米,并且最大发射发生在599纳米,而对于BODIPY FL的相应值是503和512纳米。 另外,将试样同时用DAPI染色(在细胞核靶向DNA;蓝色发光)。 注意没有来自蓝色(DAPI)荧光信号,但明亮的橙黄色荧光由管状线粒体展出,并从肌动蛋白丝在细胞质中的绿色发光。

小鼠肠的薄膜部沾上Alexa Fluor 350麦胚凝集素,蓝色荧光的凝集素特定于杯状细胞的粘液示于图2(b)。 另外,将试样同时沾上的Alexa Fluor 568鬼笔环肽(丝状肌动蛋白; 600纳米发射)和SYTOX绿(核; 504纳米激发和523纳米发射)。 请注意没有从蓝色荧光(Alexa Fluor 350)的信号,但在核组织标本,由于SYTOX绿色的明亮的绿色荧光,和肌动蛋白的刷状缘的橙红色荧光。奥林巴斯显微镜

如图2(c)展示了在中国仓鼠卵巢(CHO线),该转染含有互补DNA到THY-1,驻留在高尔基体小糖蛋白的增强型绿色荧光蛋白(EGFP)载体的细胞的培养荧光发射。 该细胞系表达了主要定位于高尔基体,而且也分布到囊泡整个细胞质EGFP-THY-1的嵌合蛋白质。 将试样标有一些额外的探头,包括MitoTracker红CMXRos(针对线粒体;红色荧光)和DAPI(针对核;蓝色荧光)。 注意在包围核,这是缺乏的蓝色荧光从DAPI与该过滤器相结合的区域的高尔基体的突出绿色染色。 在细胞质囊泡还呈现绿色荧光,但在较小的程度比见于高尔基。 此外,从MitoTracker染料而产生的橙红色荧光是在线粒体网络清晰可见。

荧光薄小鼠肾脏的部分沾上多个(3)的荧光团是在图2(d)所示。 在组织切片细胞核靶向与核酸探针的DAPI,当在细胞培养物和组织切片结合到DNA,其具有最大激发在358纳米,并且具有发射最大值在461纳米。 另外,低温恒温器部也同时沾上的Alexa Fluor 488麦胚凝集素(肾小球和曲小管; 519纳米发射)和Alexa Fluor 568鬼笔环肽(丝状肌动蛋白和刷状缘)。注意信号的同时从绿色(Alexa Fluor 488)和红色(Alexa Fluor 568)的探针,但由于没有蓝色荧光由于DAPI,这是由该过滤器组合抑制的存在。

牛肺动脉血管内皮细胞的培养即进行免疫荧光标记的同随后山羊缀合BODIPY FL抗小鼠Fab片段初级抗牛的α-微管蛋白的小鼠单克隆抗体,图2(e)中示出。 将细胞培养物同时沾上德克萨斯红鬼笔环肽和DAPI,靶向的细胞骨架肌动蛋白网络和DNA在细胞核中,分别。 最大吸收BODIPY FL的是505纳米,并且最大发射发生在513纳米,而对于德克萨斯红的相应值是595和620纳米。 注意没有来自蓝色(DAPI)荧光信号,但明亮的红色荧光通过在细胞质的肌动蛋白丝,并从微管网络的绿色发射表现。

从石松球果( 伸筋草 )自发荧光发射强度薄部分体现在图2(F)。 在植物组织中的内源性的自发荧光产生于各种生物分子,包括叶绿素,β-胡萝卜素,叶黄素和。 在蓝色和绿色的激发区域,叶绿素具有吸收带,具有高消光系数,并产生一个显著量荧光在与450和550纳米之间的波长激发。 对于以上所示的球杆苔藓组织,注意自发荧光发射强度中的绿色和红色光谱区域的存在,这是尼康FITC-TRITC荧光滤波器组合的特性。