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尼康显微镜蓝色激发块B-3A(长波辐射)

2015-04-09  发布者:admin 

尼康的B-3A荧光滤波器组配有一个很宽的激发带通范围(70纳米),可提供宽得多的吸收窗比任何在蓝色激励系列中的其他组合。 紫外,可见和近红外透射此长通发射滤波器组合频谱剖面,在图1下图所示的宽激发带使滤波器组与卤钨灯照射可以采用,虽然它也与电弧放电有用调查有非常微弱的信号探头时灯。 所述长通屏障(发射)滤波器具有520纳米的截止波长,并且能够从绿色,黄色,橙色和红色荧光团具有在蓝色波长区域的吸收带传送显著量的信号的。 类似此类中的其他过滤器的组合,在B-3A具有长通双色镜切,在505纳米的波长。

蓝色激发滤光片座B-3A规格:

  • 激发波长筛选:420-490纳米(带通,455 CWL)

  • 双色镜截止波长:505纳米(长通,LP)

  • 屏障过滤波长:520纳米截止点(长通,LP)

包含在B-3A组合的长通发射滤波器透射比任何 E -系列过滤器集显著更多的信号,并且比得上在蓝色激励类的其他长通(B-1AB-2A)的组合(具有异常显示高得多的噪声电平的)。该组的目的是使采用钨 - 卤素灯照明用于激发在蓝色光谱区的荧光,并采用一个二色镜,用于在绿色,黄色,橙色发射的荧光发射进行了优化,和红色区域。 在505纳米的二色镜截止波长加上长通屏障过滤器(切上的520纳米波长)是类似的其他蓝激发滤光片组合。

B 3A滤波器集合产生的图像是非常明亮的(特别是与电弧放电照明),但有一个显著低信噪比比得到利用带通发射滤波器滤波的图像。 其结果是,背景区域是比那些从带通发射滤波器打火机,或在某些情况下,从其他长通滤波器的组合(取决于照明源和其它因素)。 在绿色,黄色,橙色,和红色区域的荧光发射是在利用B-3A滤波器组合采集到的图像经常可见(参见图2)。 吖啶橙,吖啶红,将Alexa Fluor 430的Alexa Fluor 488,叶绿素(自发荧光),荧光探针,LysoTracker衍生物,膦,阿的芥末,塞夫龙河探头和四环素:调查以下荧光团时,这套建议。 在图2中呈现的图像表明具有多种针对不同细胞内位置蓝色吸收荧光探针的这种过滤器组合的性能。 在一般情况下,用B-3A滤波器组合而生成的图像显示出比与其它的蓝色激发套观察多得多的背景信号。

示于图2(a)是从大鼠袋鼠的培养(PTK2)上皮细胞进行免疫荧光标记的同随后缀合的Alexa Fluor山羊抗-小鼠Fab片段初级抗牛的α-微管蛋白的小鼠单克隆抗体的荧光发射强度488.最大吸收的Alexa Fluor 488的是495纳米,并且最大发射发生在519纳米。 需要注意的是在整个细胞质中并进入两个子细胞之间的中间体延伸的细胞内微管网络的突出染色。 另外,将试样同时染色核蛋白质CDC6(偶联至太平洋蓝),以及用于F-肌动蛋白与鬼笔环肽从蓝色缀合的Alexa Fluor 568注缺席信号(太平洋蓝)的荧光团,这是不有效地激发在该波长区域。然而,来自红色荧光探针显著量信号(的Alexa Fluor 568)所用的皮层中观察到。(奥林巴斯显微镜)

由薄小鼠肾脏的部分标记与多个(3)的荧光团的荧光发射被示出在图2(b)。 在组织切片细胞核靶向与核酸探针的DAPI,当在细胞培养物和组织切片结合到DNA,其具有最大激发在358纳米,并且具有发射最大值在461纳米。 另外,低温恒温器部也同时沾上的Alexa Fluor 488麦胚凝集素(肾小球和曲小管)和Alexa Fluor 568鬼笔环肽(丝状肌动蛋白和刷状缘)。 注意没有信号从蓝色(DAPI)荧光团,但红色的显著水平(的Alexa Fluor 568)荧光渗出通过在图像的许多区域。

图2(c)和图2(e)描绘的中国麂皮鹿皮标记的Alexa Fluor 488(图2的(c))和SYTOX绿(图2(e))的成纤维细胞。 将细胞在如图2(c)中免疫荧光标记的同随后缀合的Alexa Fluor山羊抗-小鼠Fab片段初级抗OXPHOS复合V抑制蛋白的单克隆抗体(鼠)488.此外,将试样同时染色F-肌动蛋白的Alexa Fluor 350(蓝色)缀合到鬼笔环肽,并用于DNA与SYTOX橙。 注意信号的同时从橙色和绿色荧光团,但不存在任何显著发光强度从的Alexa Fluor 350,这是不能有效地激发的蓝色波长区域的存在。 在许多情况下,SYTOX橙染色多种除了DNA的细胞质的元素,如在图像中是显而易见的。

SYTOX绿被用来染色的染色质在图2(E)显示的细胞的细胞核。 最大吸收的SYTOX Green是504纳米,并且最大发射发生在523纳米。 另外,将试样同时标记与初级抗人氧化磷酸化复合物V抑制蛋白的小鼠单克隆随后偶联于太平洋蓝(最大吸收在410纳米)的山羊抗小鼠Fab片段的抗体。 肌动蛋白细胞骨架网络也被标记鬼笔环肽缀合的Alexa Fluor 568注高信号电平的存在下从红色(的Alexa Fluor 568)的荧光团,但是从太平洋蓝,非常弱的荧光发射强度是不能有效地激励这光谱区域。

由薄蕨类根茎部分自发荧光发射强度( 全缘贯众 )组织示于图2(f)所示。 在植物组织中的内源性的自发荧光产生于各种生物分子,包括叶绿素,β-胡萝卜素,叶黄素和。 在蓝色区域,叶绿素具有吸收带,具有高消光系数,并产生一个显著量荧光在与420和460纳米之间的波长激发。 注意频谱渗出通过从自体荧光发射在黄色和红色光谱区域用B-3A滤波器组合的存在。