设为首页 | 添加收藏 |sitemap |百度地图 |
货真价实 坦诚无欺
新闻资讯

徕卡显微镜在植物细胞中重组蛋白对组织和植物的影响

2015-01-29  发布者:admin 

重组DNA技术的发展已经允许利用植物用于生产生物制药。 相对于其他生产平台,植物便宜,易于扩展和缺乏人类病原体。 此外,由于植物是真核生物它们可以处理和修改复杂的人类蛋白质。在这里,我们调查红色荧光蛋白的命运,在相同的监管信号,植酸酶在双子叶植物烟草表达。

介绍

N-糖基化是最佳的研究的翻译后修饰之一,并可以具有生物活性的一个显著影响,靶向和治疗性糖蛋白的药物动力学行为。 寡甘露糖型(OMT)N-聚糖可以通过使用C端ER-的方法使信号(H / KDEL)靶向重组蛋白积聚在ER来制造。

靶向裂解或贮藏液泡的糖蛋白含有paucimannosidic N-聚糖而那些靶向到细胞外空间包含任一终端葡萄糖-NAC残基,除了植物特定的核心岩藻糖和木糖或包含进一步扩展,例如路易斯一个决定因素。奥林巴斯显微镜

虽然ER靶向通常优选,因为它导致更高的蛋白质的稳定性和产率,在某些情况下的OMT N-聚糖的存在并不总是理想的药物蛋白。其他报告表明特定的植物paucimannosidic N-聚糖是可取的,已涉及到重组蛋白的治疗效率的增强。

因此,亚细胞定位和沉积部位已成为生产药品的一个重要考虑因素。 在我们的组完成先前的研究表明,重组真菌植酸酶携带信号肽并没有进一步的靶向信号被小区内的在谷物胚乳的蛋白质贮藏液泡沉积。

红色荧光蛋白定位于烟草

图1:红色荧光蛋白定位于烟草。 A.荧光显微镜,B,C电子显微镜,B',C'。 共聚焦显微镜,。 A.叶表皮,看到红色荧光蛋白的质外体(箭头)的积累。 B,B'。 种子胚,细胞壁(CW,箭头)上显著信号。 C,C'。 种子胚乳。 见的质外体中的标记(CW,箭头)以及在所述细胞(C',箭头)内的一些结构。 酒吧2微米(A,B',C'),0.25微米(B,C)。

结果与讨论

图1显示重组DsRed的在烟草细胞的沉积。 重组红色荧光蛋白携带的信号肽并没有进一步的目标信号被组成型表达烟草。 红色荧光蛋白的荧光在叶片中观察到体内的Leica DM5000(A)中,而被的Leica SP2共聚焦显微镜下观察种子(B',C')。

对于电子显微镜(B,C),小件烟叶,以及去除涂层烟草种子固定在4%多聚甲醛和0.5%戊二醛。 通过乙醇系列脱水后,将样品渗透并包埋在LRWhite树脂和块被允许进行聚合在60℃下2天。 超薄切片(80纳米)得到用Leica ULTRACUT UCT并收集在金网格和用重组的红色荧光蛋白免疫定位后飞利浦EM-400型电子显微镜观察。

在叶epidermical细胞(图1A)的周围的荧光表明重组DsRed的被有效地经由营养组织默认途径分泌,类似烟叶其它重组蛋白质或在稻叶。红色荧光蛋白也有效地分泌在烟草胚(图1B,B')和丰富金探针可以观察到装饰胚胎细胞壁。 无显著信号可与油体或细胞(图1B,B')的任何其他隔室中被观察到。 在胚乳,显著标签也可以表明该蛋白被分泌(图1C,C')的细胞壁内观察到。 然而,一些荧光结构(最有可能的蛋白质贮藏液泡)可以在胚乳细胞(图1C')内进行观察。

有趣的是说,在烟草的胚乳,作为谷物的种子,是一个短命的终端组织专门存放食品将无法生存发芽。 谷类淀粉胚乳细胞意思是死在萌发和水解酶的动员储备的发芽过程中糊粉细胞分泌的,而双子叶植物的种子的成熟胚乳细胞通常包括活细胞分泌,这将需要以降解胚乳水解酶细胞壁以允许胚根出现。

我们的结果证实了在单子叶植物和双子叶植物胚乳组织之间的生理差异。 而在谷物重组植酸酶和重组抗-HIV抗体2G12被定向到PSV船,红色荧光蛋白在烟草胚乳仅部分保留下来,像也报道了上述重组蛋白。

不同的定位在不同的组织和物种的结果在不同的糖形的重组蛋白,因此,应考虑到的帐户时谈到选择一个平台,药品在植物中生产。