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尼康显微镜紫外激发快蓝色荧光蛋白(带通)

2015-01-06  发布者:admin 

紫外线和用于高性能尼康蓝色荧光蛋白可见光透射光谱图(BFP)滤波器的组合在图1,本滤波器组由使用带通发射滤波器,其不同于紫罗兰组中的另外两个50纳米以下所示通带(435-485纳米)限制检测到的那些发射在蓝光光谱区域的荧光染料。 此外,窄22纳米的激发带通(延伸至仅401纳米)最大程度地减少自体荧光,并且被耦合以较低的二色镜截止波长(420纳米)相比被用在其它紫色过滤器集。 虽然主要设计用于荧光蛋白的成像,此带通发射组合是用于获得具有多个标签标本图像时荧光团中的一个是有效地激发在紫色光谱区域是有用的。

紫激发滤光片座BFP规格:

  • 激发波长筛选:379-401纳米(带通,390 CWL)

  • 双色镜截止波长:420纳米(长通,LP)

  • 屏障过滤波长:435-485纳米(带通,460 CWL)

BFP滤波器块被设计为最佳性能与蓝色荧光蛋白,并通过利用带通发射滤波器,红色和绿色荧光的在乘法 - 标记的试样在黑色背景上排除的检测,产生的图像具有丰富的和深蓝色的颜色。 窄带宽激发滤光片旨在减少或消除内源性烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(NADH)的激发在紫外线和紫色波长的光。 学习下面的荧光团时,BFP过滤器组合推荐:蓝色荧光蛋白,增强蓝色荧光蛋白,超发光蓝色荧光蛋白,瀑布蓝,儿茶酚胺,荧光胺,羟基香豆素,Leucophor SF,太平洋蓝,以及TNS。 在图2中呈现的图像表明具有多种针对不同细胞内位置紫罗兰吸收荧光探针的这种过滤器组合的性能。

示于图2(a)和2(e)是从印 度麂的培养鹿皮成纤维细胞进行了免疫荧光标记与任一主抗牛的α-微管蛋白的发光强度(图2(a))或抗OXPHOS复合V抑制剂蛋白(图2(e))的随后偶联于太平洋蓝山羊抗-小鼠Fab片段的小鼠单克隆抗体。 最大吸收太平洋蓝的是410纳米,并且最大发射发生在455纳米。 注意细胞内微管的突出染色(图2(a))和线粒体(图2(e))的网络上延伸遍及在这些标本的细胞质中。(奥林巴斯显微镜)

图2(b)表示由薄小鼠肾脏的部分用DAPI染色,将Alexa Fluor 488麦胚凝集素,绿色荧光的凝集素是特定于肾小球和曲小管的荧光发射强度。 最大吸收的DAPI的是358纳米,并且发射最大值是461纳米。 另外,检体被同时染色的Alexa Fluor 568鬼笔环肽(丝状肌动蛋白)。注意没有光谱渗出通过从红色和绿色的荧光团。 图2(D)呈现具有用DAPI染色的细胞核牛肺动脉培养细胞。 尽管DAPI的荧光团通常是用紫外线激发滤光片组合使用,许多紫色过滤器集能产生极好的影像。

从大鼠袋鼠肾上皮细胞(PTK2线)的培养深蓝色荧光发射强度是在图2的(c)。 将培养物免疫荧光标记与初级抗细胞角蛋白(一种中间丝蛋白),随后偶联至码头蓝山羊抗-小鼠Fab片段的小鼠单克隆抗体。 最大吸收码头蓝的是365纳米,并且最大发射发生在460纳米。 另外,将试样同时染色线粒体与MitoTracker红CMXRos。 注意没有信号从红色荧光团与该带通发射滤波器的组合。

自身荧光在植物组织(玉米粒组织部分)在图2(f)中表示的,并表明内源性荧光团在这些标本的深蓝色发光光谱。 注意,与BFP滤波器组合表现出少得多的背景荧光比所述长通发射(Ⅴ-1AV-2A)紫色激发过滤器集的拍摄图像。