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尼康显微镜绿色激发块Cy3 HYQ(带通)

2015-01-03  发布者:admin 

都为尼康Cy3的紫外线,可见光和近红外透射光谱曲线(高性能设置与尼康HYQ指定)滤波器组合下面示于图1.该滤波器组是两个在Nikon绿色激发系列1那采用的带通发射(阻挡)滤波器而不是一个长通型,并且按照设计,有效地限制了从荧光团发射外目标的光谱的波长范围的干扰。 如同在HYQ系列的其它的过滤器,切割上和截止转换在Cy3 HYQ滤波器的斜率很陡(只有几个大小纳米),以帮助减少排放交叉,并通过频带为扩大收集更多的信号。

绿色激发滤波器模块的Cy3(HYQ)规格:

  • 激发波长筛选:530-560纳米(带通,545 CWL)

  • 双色镜截止波长:570纳米(长通,LP)

  • 屏障过滤波长:573-648纳米(带通,610 CWL)

所述的Cy3荧光滤波器组合(如以上所讨论,尼康HYQ高性能干涉滤光器系列中的一员)是在结构上的标准的带通发射绿色激发组(G-2E / C)的相似,但具有更宽的带通的窗口的激发和发射(屏障)的过滤器。 这些高性能的过滤器被制造具有更大数目同时在激发和发射滤光片干涉腔,允许频谱轮廓之间的更接近而不遭受过度的串音。 该二色镜截止波长是570纳米,并且是结合了介质30纳米激发通带(530-560纳米)连同一个非常广泛的75纳米的发射通带(573-648纳米)。 该组能够有选择性的激励和检测在多个标记实验中使用的具体流行荧光团,并且通常适用于广泛范围的由绿色的波长激发探针。

所述的Cy3 HYQ滤波器组合,推荐用于与花青荧光探针的Cy3使用,并且被设计成减少或消除从荧光团发射的红光和近红外干扰时的探针,如四甲异硫氰酸酯(TRITC)和DII中的多个标记中使用技术。 所述的Cy3 HYQ滤波器集合可以用基本相同的荧光染料为G-2E / C组合被利用,并产生,相比之下,由于增加的激发和发射能量稍微明亮的图像所允许的更宽的带通的窗口。 此外,发射带通到较低的波长的延伸,相对于G-2E / C组,产生具有色调图像移向橙色和黄色。 Cy3的,Cy3.1.8,吖啶红,将Alexa Fluor 546,的Alexa Fluor 555,茜素红,BODIPY探头,钙橙,DiI标记,DiIC16,DiIC18,溴化乙锭,NeuroTrace 530 /:学习以下的荧光基团,当Cy3的HYQ集推荐615,碘化丙啶,派洛宁B,RedoxSensor红CC-1,罗丹明衍生物,塞夫龙河艳红和TRITC。 在图2中呈现的图像表明具有多种针对不同细胞内位置吸收绿光的荧光探针的这种过滤器组合的性能。

如图2(a)是沾上MitoTracker红CMXRos,它的目标细胞内的线粒体的网络牛肺动脉内皮细胞培养的荧光发射强度。 最大吸收MitoTracker红CMXRos的是579纳米,并且最大发射发生在599纳米。 另外,将试样同时用DAPI染色(在细胞核靶向DNA;蓝色发光)和BODIPY FL-phallacidin(靶向肌动蛋白;绿色发光)。 注意没有信号从蓝色(DAPI)和绿(BODIPY)荧光团,但明亮的橙黄色荧光由管状线粒体发挥。

印度麂的鹿皮沾上的Alexa Fluor 568缀合鬼笔环肽,其结合到细胞内丝状肌动蛋白网络的成纤维细胞的培养,是在图2(b)中。 最大吸收的Alexa Fluor 568的是578纳米,并且最大发射发生在603纳米光谱的橙色区域。 另外,将试样同时用DAPI染色(在细胞核靶向DNA;蓝色发光)和MitoTracker绿FM(靶向线粒体;绿色发光)。 注意没有信号从绿色(MitoTracker)和蓝色(DAPI)的荧光团,它们是不能有效地激发在绿色波长,但明亮的橙红色荧光的肌动蛋白丝发挥。(奥林巴斯显微镜)

由薄小鼠肠的部分沾上的Alexa Fluor 350麦胚凝集素,蓝色荧光的凝集素特定于杯状细胞的粘液中演示了图2的(c)的荧光发射强度。 另外,将试样同时沾上的Alexa Fluor 568鬼笔环肽(丝状肌动蛋白; 600纳米发射)和SYTOX绿(核; 504纳米激发和523纳米发射)。 注意背景噪声相比于其他尼康长通滤波器的组合(G-2AG-2B),并在显著量的Alexa Fluor 568显示的图像中所产生的黄-红信号的低电平。

示于图2(d)是HeLa细胞免疫荧光标记的同随后缀合的Alexa Fluor 546的吸收最大值的Alexa Fluor 546山羊抗-小鼠Fab片段初级抗组蛋白(锅)鼠单克隆抗体的556纳米,并且发射最大值出现在573毫微米(在可见光光谱的黄色区域)。 第一抗体,从HeLa细胞的纯化核级分生产,特异性结合的抗原决定簇,其存在于所有五个组蛋白(H1,H2A,H2B,H3和H4)。 请注意,从发生有丝分裂的细胞中强橙黄色荧光强度,但间期核的降低排放强度。

在图2(e)在对女儿鼠袋鼠(PTK2)上皮细胞,示出,分别是那些在被免疫荧光标记的同随后缀合的山羊抗小鼠Fab片段初级抗牛的α-微管蛋白的小鼠单克隆抗体的培养到的Alexa Fluor 546的吸收最大值的Alexa Fluor 546的是556纳米,并且最大发射发生在573纳米(在可见光光谱的黄色区域)。 需要注意的是在整个细胞质中延伸的细胞内微管网络的突出黄橙色染色。

自体荧光发射强度从松( 火炬松 )花粉粒是表现在图2(F)。 在植物组织中的内源性的自发荧光产生于各种生物分子,包括叶绿素,β-胡萝卜素,叶黄素和。 在蓝紫色区域中,叶绿素具有吸收带,具有高消光系数,并产生一个显著量荧光在与400和440纳米之间的波长激发。注意自发荧光发射强度中的橙色和红色光谱区域的存在,这是强烈让人想起暗视场图像的。