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奥林巴斯显微镜的表位标记

2015-01-01  发布者:admin 

表位(也称为抗原决定簇 )是生物结构或序列,例如蛋白质或碳水化合物,它是由一种抗体作为抗原识别。 当形成在其中的氨基酸或糖线性排列的蛋白质或多糖的面积适当的结构发生了抗原的识别。 大多数蛋白质通常有几种表位。 抗体提供了一个重要的技术(称为免疫测定 ),用于识别特定细胞成分(蛋白质,脂质,碳水化合物等),以跟踪功能,分发和修改的生活和固定细胞内的感兴趣的蛋白质。

所述抗体通常是通过精炼目的蛋白质并在兔或小鼠注射它获得。 但是,这需要时间的显著时期,也有在抗体创建失败,很多情况下(没有表位)。 然而,在DNA重组技术的最新进展已使人们有可能创造一个融合蛋白,其中感兴趣的蛋白质结合与蛋白质(肽)的小片段工作作为表位。 具有标记的表位的蛋白质然后可以通过使用特异性抗体的表位来检测。

奥林巴斯显微镜用表位标记是类似于构建绿色荧光蛋白( 两性平等问题协调 )的重组的做法。 从目标蛋白质的基因插入到表位标签矢量和所述目标蛋白与它的标签是由载体的转染细胞中表达。 该蛋白质是根据蛋白质的原始属性在细胞内分布。 当使用两性平等问题协调,靶蛋白可以容易地观察到,因为GFP标签发出荧光; 然而,使用表位标记时,靶蛋白可以仅通过免疫学方法,因为表位标签是不起作用的细胞中检测到。奥林巴斯显微镜

表位标记的优点

  • 重组方法提供了一个非常短的时间内要求相比普通抗体制剂,这需要超过一个月免疫实验动物。

  • 使用单一的表位标签,在检体的各种蛋白质可通过相同的标记特异性抗体来检测。

  • 重组标签能够以较低的成本比抗体制剂来完成。

  • 表位标签是由3至14个氨基酸,并且不破坏正常的蛋白质的功能。

  • 表位标记可以使用两种蛋白质具有相似的抗原之间进行区分。

  • 该技术可以用于检测蛋白质,是非常困难的分离和纯化。

下表显示了通常用作表位标签的氨基酸安排:

常见的表位标签
名字氨基酸含量氨基酸序列
HA9YPYDVPDYA
FLAG8DYKDDDDK
C-MYC10EQKLISEEDL
表1

发现

直接和间接的方法可以用于像荧光抗体技术。 与直接的方法,所述抗体为标记标记有荧光染料,同时用间接法,针对该标记的抗体作为初级抗体被施加并在该标记有荧光染料的二抗进行检测。

有关表位标记的更多信息,请参考罗氏网站上的实验手册。

单字母氨基酸代码
A - AlanineC - CysteineD - AspartateE - Glutamine
F - PhenylalanineG - GlycineH - HistidineI - Isoleucine
K - LysineL - LeucineM - MethionineN - Asparagine
P - ProlineQ - GlutamineR - ArginineS - Serine
T - ThreonineV - ValineW - TryptophanY - Tyrosine
表2