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尼康显微镜双频激发块DAPI-FITC

2014-12-31  发布者:admin 

尼康双激发带通DAPI-FITC滤波器集合被设计用于同时检测的流行的荧光团的DAPI并且当组合应用的FITC(异硫氰酸荧光素),并结合了激发滤光片具有窄带通窗中的紫(400-418nm)和蓝色(478-495nm)光谱区。 紫外线和尼康显微镜DAPI-FITC滤光片组合可见光透射光谱图说明如下图1中的双发射(阻挡)滤波器的带通区域,并入到单个滤光器,允许检测来自两个荧光染料的蓝色和绿色发射同时,同时尽量减少探针之间的频谱交叉。 透射和反射带的每一个滤光器,以及具有两个带通透射区域二色性反射镜的应用程序之间的急剧过渡(多色;选择为互补的发射和激发波长),允许双波段信号检测以最小的干扰。

双激发滤波器模块DAPI-FITC规格:

  • 激发波长筛选:400-418nm(带通,409 CWL)和478-495nm(带通,487 CWL)

  • 多色镜波长:435-470nm(带通)和505-570nm(带通)

  • 屏障过滤波长:450-465nm(带通,458 CWL)和510-555nm(带通,533 CWL)

DAPI-FITC双波段荧光滤波器组合被用于同时检测所述荧光染料DAPI和FITC与频带之间的最小串扰的专门设计的,并且可以与其他对具有相似光谱分布的荧光探针的使用。 滤波器组的较短波长信道将选择狭义的光谱区为紫色激发和蓝色发射的检测,而较长的波长分量对应于蓝色激发绿色发光检测。 短波长激发通带传输简档被刻意降低,以提供与蓝色激发荧光信号更好的平衡。 研究以下的荧光团的各种组合时,此滤波器组建议:DAPI,蓝色荧光蛋白(BFP)或Hoechst 染料(紫色激发),配对用FITC,绿色荧光蛋白(GFP),的Cy2,或的Alexa Fluor 488(蓝激发)。 在图2中呈现的图像表明具有多种针对不同细胞内位置的荧光探针对这个滤波器组合的性能。

示于图2(a)是使用DAPI-FITC滤波器块和印度麂的鹿皮沾上的Alexa Fluor 488缀合鬼笔环肽,其结合到细胞内丝状肌动蛋白网络的成纤维细胞的培养的荧光发射轮廓。 的可见光最大吸收的Alexa Fluor 488的是495nm,并且最大发射发生在519nm,在光谱的绿色区域中。另外,将试样同时用DAPI染色(靶向DNA在细胞核中;激发在358nm,并且发射在461nm)和MitoTracker红CMXRos(靶向线粒体;红色发光)。 注意没有来自红色荧光团(MitoTracker)信号,但明亮的绿色荧光的肌动蛋白丝和从DAPI细胞核的稍低强度蓝色信号表现出的存在。(奥林巴斯显微镜)

小鼠肠沾上的Alexa Fluor 350麦胚凝集素,蓝色荧光的凝集素特定于杯状细胞的粘液的薄膜部,是在图2(b)中。 另外,将试样同时沾上的Alexa Fluor 568鬼笔环肽(丝状肌动蛋白; 600nm发射)和SYTOX绿(核; 504nm激发和523nm发射)。 注意从蓝色荧光团(Alexa Fluor 350),但是核中的组织标本的明亮的绿色荧光的低信号电平由于SYTOX绿荧光。 这种双重激发滤光片组合有效地消除了红色(的Alexa Fluor 568)探测信号。

如图2(c)展示了从大鼠袋鼠(PTK2)上皮细胞的培养物被认为免疫荧光标记的同随后山羊缀合的Alexa Fluor 488抗-小鼠Fab片段初级抗牛的α-微管蛋白的小鼠单克隆抗体的荧光发射强度。另外,将试样标记用Hoechst 33258,其选择性地结合到DNA中的细胞核,和MitoTracker Red CMXRos(靶向线粒体;红色荧光)。 注意突出绿色染色,在整个细胞质延伸的细胞内微管网络,和从Hoechst 33258的蓝色发射绑定到DNA的细胞核中。 在图像的下部的细胞中出现前中期或中期状态下进行有丝分裂。

瑞士小鼠(3T3线)细胞免疫荧光标记的同随后山羊缀合的Alexa Fluor 568抗-小鼠Fab片段初级抗细胞色素氧化酶的小鼠单克隆抗体,图2(d)是示出。 将试样也标记有几个额外的探针,包括凝集素罗马蜗牛凝集素(HPA)的缀合的Alexa Fluor 488(绿色发光),其选择性地结合糖蛋白在该细胞系中的高尔基体。 细胞骨架肌动蛋白丝染色的Alexa Fluor 680(红色激发;近红外辐射)和核DNA标记有DAPI(蓝色发光)。 注意高尔基体的突出绿色染色,并在细胞核中观察到的蓝色荧光强度。

由薄小鼠肾脏的部分沾上多个(3)的荧光团的荧光发射是在图2(e)所示。 在组织切片细胞核靶向与核酸探针的DAPI,当在细胞培养物和组织切片结合到DNA,其具有最大激发在358nm,并且具有发射最大值在461nm。 另外,低温恒温器部也同时沾上的Alexa Fluor 488麦胚凝集素(肾小球和曲小管)和Alexa Fluor 568鬼笔环肽(丝状肌动蛋白和刷状缘)。 注意信号的同时从蓝色(DAPI)和绿(的Alexa Fluor 488)的探针,但由于没有橙红色荧光由于将Alexa Fluor 568缀合物中的肌动蛋白和刷状缘的网络的存在。

从玉米籽粒的自发荧光发射( 玉蜀黍 )薄膜部中演示了图2(f)所示。 在植物组织中的内源性的自发荧光产生于各种生物分子,包括叶绿素,β-胡萝卜素,叶黄素和。 在紫外和蓝色激发区域,叶绿素具有吸收带,具有高消光系数,并产生一个显著量荧光在与350和500nm之间的波长激发。 对于以上所示的玉米仁组织,注意自发荧光发射强度中的蓝色和绿色光谱区域的存在,这是尼康DAPI-FITC荧光滤波器组合的特性。