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尼康显微镜蓝色激发块B-1A(长波辐射)

2014-12-28  发布者:admin 

尼康B-1A荧光激发块组是为了最大限度地减少自体荧光和光漂白设计具有窄通带激发范围(20纳米)。紫外激发块组合,可见光和近红外透射光谱曲线是在图1的长通屏障下面示出(发射)激发块是能够从具有显著吸收在上部青绿色,黄色和红色荧光发射信号的波长区域。类似于在此系列的其它的激发块,所述的B-1A具有长通二色镜具有一个切口上的505纳米的波长。

蓝色激发块座B-1A产品规格:

  • 激发波长筛选: 470-490纳米(带通,480 CWL)

  • 双色镜截止波长: 505纳米(长通,LP)

  • 屏障过滤波长: 520纳米截止点(长通,LP)

包含在该长通发射滤光片B-1A组合传输速度要比任何显著更多的信号E -系列激发块套,其中利用带通发射滤光片,但20纳米激发带宽是最窄的尼康显微镜蓝色激发/长通发射滤光片收藏。其结果是,从图像中的B-1A激发块组合都不亮如那些与生产B-2AB-3A。在一般情况下,然而,具有长通发射滤光片的蓝激发滤光片组合产生比它们的带通(发射激发块)对口相当亮的图像,但通常在低得多的信号-噪声比为代价(导致更轻的背景)。在黄色,橙色的荧光发射,和红色区域是在使用收集的图像经常可见B-1A激发块组合(参见图2)。

所述B-1A激发块组合被设计为最大化时结合有染液采用如碘化丙啶(由蓝色光(包括荧光素和Alexa Fluor 488)激发流行荧光染料的发光的PI)或四甲基罗丹明异硫氰酸酯(TRITC)。这组也正在研究以下荧光团时,建议:Acridine Orange, Acridine Yellow, Auramine O, 5-carboxyfluorescein ( 5-FAM ), Alexa Fluor 488, BODIPY FL, Calcein, Calcein Green-1, coriphosphine O, Cy2, DiO, fluorescein isothiocyanate ( FITC ), Fluo-3, FluoroJade, FluorX, FM 1-43, LysoTracker Green, MitoTracker Green, Oregon Green derivatives, oxacarbocyanine 染料 (例如 DiO ), RH 414, Rhodamine 110, Spectrum Green, SYTO, SYTOX Green, YOYO-1, and YO-PRO-1.。在图2中呈现的图像表明具有多种针对不同细胞内位置蓝色吸收荧光探针的这种激发块组合的性能。

示于图2(a)是从大鼠袋鼠的培养物(荧光发射强度PTK2)上皮细胞进行免疫荧光标记与初级抗牛阿尔法随后的山羊抗小鼠β-微管蛋白的小鼠单克隆抗体的Fab缀合的Alexa Fluor片段488.最大吸收的Alexa Fluor 488的是495纳米,并且最大发射发生在519纳米。需要注意的是在整个细胞质中延伸的细胞内微管网络的突出染色。另外,将试样同时染色核蛋白质CDC6(偶联至太平洋蓝),以及用于F-肌动蛋白与鬼笔环肽从红缀合的Alexa Fluor 568注信号的存在(的Alexa Fluor 568)的荧光团,但没有来自蓝色(太平洋蓝)探针,其是不能有效地激发在由该激发块组合使用的波 长的荧光发射的。

图2(b)说明了的性能的B-1A使用被标记SYTOX绿染色的染色质在核印度麂细胞的培养物过滤组合。最大吸收的SYTOX Green是504纳米,并且最大发射发生在523纳米。另外,将试样同时标记与初级抗人氧化磷酸化复合物V抑制蛋白的小鼠单克隆随后的山羊抗小鼠抗体的Fab偶联于太平洋蓝(最大吸收在410纳米)的片段。肌动蛋白细胞骨架网络也被标记鬼笔环肽缀合的Alexa Fluor 568注微弱信号电平的存在下从红色(的Alexa Fluor 568)荧光团。奥林巴斯显微镜

小鼠肠的薄切片染色的Alexa Fluor 568鬼笔标本(丝状肌动蛋白; 600纳米排放)和SYTOX绿色(核; 504纳米激发和523纳米的排放)是在图2(c)所示。注意背景噪声相比于其他尼康长通激发块的组合(低级别的B-2AB-3A),和显著量的Alexa Fluor 568显示的图像中所产生的红信号。图2(d)表示的HeLa上皮细胞进行免疫荧光标记的同随后的山羊抗小鼠初级抗OXPHOS复合V抑制蛋白的单克隆抗体(小鼠)的Fab缀合的Alexa Fluor 488的吸收最大值的Alexa Fluor 488是495的片段纳米,并且最大发射发生在519纳米。另外,将试样同时染色缀合鬼笔环肽F-肌动蛋白的Alexa Fluor 568(红色),以及用于DNA用4',6-二脒基-2-苯基吲哚(DAPI)。注意信号的来自红色和绿色荧光,但由于没有从DAPI,任何显著发光强度是不能有效地激发的蓝色波长区域的存在。

从染色的BODIPY FL phallacidin,其结合细胞内丝状肌动蛋白网络牛肺动脉血管内皮细胞的培养物的荧光发射强度,在图2(e)中示出。最大吸收BODIPY FL的是503纳米,并且最大发射发生在512纳米。另外,将试样同时用DAPI染色(在细胞核靶向DNA;蓝色发光)和MitoTracker RED CMXRos(靶向线粒体;红色发光)。注意信号从红色荧光团(MitoTracker)的存在,但不存在蓝色荧光从DAPI,这是不能有效地激发在此光谱区域。

示于图2(F)是由薄麦粒的部分(自体荧光的发光强度小麦)的组织。在植物组织中的内源性的自发荧光产生于各种生物分子,包括叶绿素,β-胡萝卜素,叶黄素和。在蓝色区域,叶绿素具有吸收带,具有高消光系数,并产生一个显著量荧光在与420和460纳米之间的波长激发。注意频谱渗出通过从自体荧光发射在黄色和红色光谱区域与存在的B-1A激发块的组合。