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徕卡显微镜激光显微切割特定应用的耗材

2014-12-24  发布者:admin 

有许多不同类型的消耗品的激光显微切割仪器。它们涵盖了广泛的应用,从基本到高度专业化,使科学家能够选择自己单独的配置无论他们的研究领域。

最常见的消耗品是各种玻璃膜载玻片与标准帽或盖条带的组合来收集dissectates。帧滑动时,培养皿有和没有PEN膜,可堆叠膜环,Ibidi载玻片和多个腔室培养玻片也可使用。此外,芯片实验室(LOC),所述AmpliGrid,一种特殊的形式可以在激光显微切割使用。

玻璃膜载玻片

覆盖有具有高的紫外线吸收膜的玻璃载片,使它们特别适合于冷相片消融(汽化),被称为玻璃膜的载玻片。这种类型的滑动示出在左侧的图1a。

施加到玻璃载片的上表面上,所述膜粘接于玻璃在其边缘处,以便一个最小的空间保留在玻璃和膜之间。将膜特殊涂层,以确保试样的最佳粘合。

在一般情况下,玻璃膜载玻片具有在膜 - 辅助的激光显微切割(LMD)多用途的应用潜力,并配有各种涂料用于不同应用。(奥林巴斯显微镜)

小心处理的箔是必不可少,以避免损坏该膜。应该避免在玻璃和膜之间积聚的水分,因为这可能会导致dissectates粘到玻璃上。有玻璃载玻片两种不同类型的膜:

PPS(聚苯硫醚)

PEN(聚萘二甲酸)


图1a和1b分别示出用于与在不同地方的载玻片的扫描阶段标准试样保持器。

 

图1A,1B:每张照片显示了扫描阶段容纳3张载玻片标准样品架。图1a示出一个载玻片(左),一帧滑动(中心)和一个Ibidi载玻片(右)。

 

(载玻片尺寸:52×76mm,使用面积为LMD 39×45 MM)

这些是PEN或PPS膜的载玻片为所用,例如,在组织切片中神经科学的形式(参见尤其是大的标本艾伦琼斯'视频)。一个特殊标本持有人可用于显微切割。大玻片可以看出,在Figsures 2a和2b。

PEN与PPS膜滑梯

(载玻片尺寸:26×76mm,使用面积为LMD 19×41mm)

标准载玻片具有PEN膜。这些可用于最LMD应用除DIC模式和在植物研究中使用的非常高的激光能量,例如。  

PEN膜的载玻片,可以在经过认证的无RNA酶和DNA酶-自由版本可用,以保证在DNA和RNA的研究无污染的工作。像的PEN膜的载玻片,PPS包衣膜载玻片还可以在几乎所有激光辅助显微切割技术中使用。的PPS膜的载玻片有较少的自体荧光和一个光滑的表面结构比与滑动PEN膜,但具有较少的抗性比PEN滑动以与二甲苯化学处理,例如。特别是,PPS比PEN更适合组合使用与HY-升套件。另外,也可以使用浸油的物镜连同载玻片用于激光显微解剖。当使用载玻片用油浸物镜,把它们在试样保持器具有面向下方的组织是重要的。

图2a和2b:该试样保持器可用于大的PEN或PPS滑动以及用于培养皿(参照图7A)。


大PEN和PPS载玻片

(载玻片尺寸:52×76mm,使用面积为LMD 39×45 MM)

这些是PEN或PPS膜的载玻片为所用,例如,在组织切片中神经科学的形式(参见尤其是大的标本艾伦琼斯'视频)。一个特殊标本持有人可用于显微切割。大玻片可以看出,在图2a和2b。

PEN盖玻片载玻片

(载玻片大小:26x76mm,使用面积为LMD 19x41mm)

这些是玻璃盖玻片载玻片用的PEN膜和可用于大多数LMD的应用,如在PEN载玻片上。除了标准的PEN载玻片盖玻片载玻片可用于高能量的应用程序和与150x物镜的组合。

帧载玻片

(载玻片尺寸:26×76mm,使用面积为LMD 16×45 MM)

帧载玻片包括可覆盖有各种膜(图3b)的金属框架的。下面的膜可用于这种类型的载玻片的:

PPS(聚苯硫醚)

PET(聚对苯二甲酸乙二酯)

POL(聚酯)

萤光灯(fluocarbon)


再加上特殊的150X干物镜,提供了极高的分辨率,无需浸油,帧载玻片是优秀的单细胞和染色体应用。作为dissectates使用帧滑动时,直接附着到该箔,它们特别适合于非常小的样品的夹层,例如用于染色体解剖。用适合恰好进入帧载玻片前面的腔中的凸起的表面结构的框架支承有助于组织切片应用到膜上。这就形成了一个平坦的表面上,并支持该膜。该框架支承形成膜的骨架,因为它是,通过提供足够的阻力和张力施加样品膜(图3a)。

等适当涂布玻璃膜载玻片,可以使用与PPS膜框架载玻片几乎任何应用除了在DIC的模式。

而用POL膜框架滑动主要用于染色体夹层,采用PET膜框架的载玻片是优秀的后续MALDI-TOF分析技术。

特别FLUO膜特别适合用于荧光,PH值和DIC。

 

图3A:用膜和框架的支持者作为“脊梁”金属框架    图3B:与框架支持者完整的帧载玻片插入


董事载玻片

从表达病理科主任的载玻片是膜免费回收使用“绘制和扫描”模式的特殊解决方案。

在“画和扫描”模式也applyable通常的标准载玻片,但因此更多的能量需要样品消融相比,DIRECTOR载玻片。

帽/离心管

夹层由LMD后,将样品滴通过重力进入收集容器中,例如离心管和它们的瓶盖。不同载玻片与瓶盖的组合是最常见的应用中的激光显微切割之一。大多数情况下,标准0.2毫升和0.5ml管中使用,无论是与空(干)帽或具有帽填充有合适的缓冲液,或类似的合适的介质。例如,用RNA酶抑制剂在帽中的溶液可以在激光显微切割过程之后立即防止核酸的分解。同样,蛋白质可以保持在稳定的状态下与缓冲溶液。空,干股提供识别dissectates的一个很好的方式,可以通过服用前/后的图片可以很容易地进行比较。基本上,microdissectate可以转移到任何标准上限。图4a和4b示出的匹配收集器帽和微量离心管。虽然可以使用专用OptiCaps,即使这些不是必需的徕卡激光显微切割。OptiCaps具有集成的光学元件,以确保最佳的照明均匀性,也可以是“粘接剂”。

 

图4a和4b:对于帽和微量离心管特殊收集装置可以在正常的尺寸被用于0.2毫升(图4A,上图)和0.5ml(图4a中,底部)。该收集器将样品下立即位于,dissectates落入直入管帽由于重力的作用。


对于8孔条,8孔条帽和多井载玻片状18-井Ibidi载玻片或LOC(芯片实验室)滑动万向支架

8孔条,可用于高容量应用(例如,对于活细胞收集到培养基),8孔条帽是理想的高通量应用。此外,万向支架适合携带(片上实验室)设备室载玻片,多井载玻片以及LOC。所有设备可以被用作用于激光显微切割收集装置。

8孔条

图5a和5b:8孔条作为dissectate集热使细胞培养物的高通量筛选。


(用作LCC模式收藏家)

收集器如这些被开发,以获得通过解剖活细胞的后续检查的更高的采样,并且可以结合在一起形成的96孔托盘。图5a和5b分别示出一个适当的保持器与8孔条,可以被接合,以形成良好的托盘。以及托盘的基础用于执行高通量筛选细胞培养物。

使用这样的筛选技术,大批量的单细胞培养物进行分析,并且如果有必要,在极短的时间内复垦。

8孔条帽

(分子生物学/ PCR)

0.2ml的8孔条盖可以用作收集器用于激光显微切割。继激光显微切割,8孔带瓶盖可以放在0.2毫升8孔条或96孔PCR-板直接插入PCR机(应要求提供)。使用8-帽带已证明适合于随后的PCR,定量PCR或其它加热或冷却过程中,特别是对于大量样品。

 

图a和6b:8孔条帽


LOC(芯片实验室) - AmpliGrid

(载玻片尺寸:26×76 MM)

该AmpliGrid是LOC(芯片实验室)的一种特殊形式,并且是另一替代用于收集LMD dissectates。所述AmpliGrid是在作为扩增平台超低体积应用疏水和亲水区域化学结构滑动。它由一个标准大小的玻璃载片,其特点是它的48反应室这也适合用于收集解剖单细胞(图7A,7B)。作为dissectates使用徕卡显微镜LMD6500 / 7000时转移到AmpliGrid通过重力的作用,液体不一定必须要施加到反应点提前,为的是与采用的弹射技术手段的情况。解剖的细胞可以被收集“干”。虽然可以使用的缓冲溶液,它不是强制性的。

细胞剥离,PCR或RT后(逆转录酶)-PCR是立即可以在AmpliGrid的使用超低体积扩增技术的48反应点。创建由疏水和亲水相互作用,胶束表面结构保持的反应混合物(其直接施加至AmpliGrid扩增)的形状的压降(通常为1微升)。

 

图7a和7b:在插入专门收集人“,LOC捕手”(AmpliGrid)保证高样品通量的PCR分析或RT-PCR方法。

通用持有人也能够为其他LOC设备,例如18孔Ibidi ®载玻片和玻片活细胞培养应用。


耗材在LCC模式中使用

下面的载玻片,在激光剥离,操作和选择技术兼容LCC(活细胞培养)模式:

培养皿(与PEN膜)

可堆叠膜环

Ibidi载玻片

这些也可以作为收集容器恢复耕种。

另外,上述的滑动可与常用的收集器(0.5毫升试管,0.2 ml反应管,8孔条,LOC(组合芯片实验室), Ibidi载玻片,常规培养皿和多个腔室培养玻片)。

培养皿

培养皿一般适合用于细胞培养(LCC),并且可有或无PEN膜。图。图8a示出了已示于图的试样保持器。2a和2b为大PEN载玻片和培养皿; 一个培养皿的PEN膜已经被插入,而不是一个大的滑动。图。图8b示出了使用的培养皿作为集电极的。

 

图8a:在这里,培养皿用在试样保持器图1中所示的大的载玻片和培养皿。2.可堆叠膜环也可以与此支架相结合。 图8b:从激光显微切割的dissectate由此处培养皿收集。


培养皿没有PEN膜

(Ø50mm)

常规培养皿未经PEN膜用于收集和recultivate的dissectate。培养皿未经PEN膜不能用于激光显微切割样品支架使用。但是,选择的区域可以被操纵的LMD激光和观察到的时间使用时间推移短片拍摄功能很长时间。

培养皿PEN膜

(Ø为50mm,使用面积为LMDØ30 MM)

细胞培养在培养皿用的PEN膜,可以在解剖LCC模式,并转移到其他培养皿(使用或不使用的PEN膜)或其它合适的收集容器。该膜可以涂覆有聚-L-赖氨酸或胶原为更好的粘附和细胞生长。

可堆叠膜环

(Ø为50mm,使用面积为LMDØ50mm)

这些是覆盖有被插入到50mm直径的标准细胞培养皿的膜环。可堆叠膜环使得能够在活小区扇区进行激光显微切割,并且是单细胞的选择是特别有用的。可堆叠膜环还可以连接以形成双链体的环系统,以使所述dissectate的无污染传输。2堆叠膜环拧在一起用于此物镜。立即进一步培养所述dissectate的也有可能与夹层技术。可堆叠膜环,可以用来作为试样夹具和作为dissectates集合持有人。拧在一起作为一个三明治,他们并不需要一个专门收集持有者 - dissectates直接捕捉底部膜环。与合适的帽或可选气候室的解剖系统使一个无污染的选择过程。

Ibidi载玻片

(载玻片尺寸:26×76mm,30微升液体适用每孔)

这些载玻片都配备了孔是专门为活细胞的激光显微切割设计的。每张载玻片有18个凹槽与PEN薄膜基地。

Ibidi载玻片可以用适于将LCC模式收集器的整个范围内进行组合。另一个无污染选择变体是所谓的滑栈(图9a,9b),由2 Ibidi滑动布置在彼此的顶部在夹层技术。细胞从这种叠落解剖由重力作用直接进入下一个较低Ibidi滑动,其被固定在一个特殊的堆叠保持件(图9a,9b)。随后恢复耕种是可能的。

的匹配帽提供进一步污染保护选项。

图9A:2 Ibidi载玻片在彼此的顶部构成载玻片栈提供与激光显微切割另一无污染选择选项。 图9B:作为收藏家的LOC持有人Ibidi载玻片。



Ibidi载玻片也可以用来作为收集装置结合的万向支架作为LOC装置(见上文)。

 

表1:膜载玻片和培养皿激光显微切割 - 切割性能,取决于膜型,膜支撑,物镜用过的比较。激光显微切割性能: - 不适合; +满意; ++好; +++非常好。ªThese物镜具有改善的光学系统中具有最佳的图像质量相结合UV光传输。D代表校正环的位置。

表1:膜载玻片和培养皿激光显微切割 - 切割性能,取决于膜型,膜支撑,物镜用过的比较。激光显微切割性能: - 不适合; +满意; ++好; +++非常好。ªThese物镜具有改善的光学系统中具有最佳的图像质量相结合UV光传输。D代表校正环的位置。

 订单号
 (*无RNA酶的载玻片)

产品说明/数量

使用面积为LMD(约)

膜的厚度

Objectivesª 
高品质图像推荐物镜CORR设置

荧光适用性


 5x

6.3xª

10x

L20x 
CORRª 

L40xCORRª

L63xCORRª

150x 

11505273 
50张载玻片/盒

玻璃,聚苯硫醚膜
(25×76mm)

19mmX41mm

1.2um

++

++

+

+++ 
D = 1.0

+++ 
D = 1.0

+++ 
D = 1.0

-

+

适用于几乎所有的应用程序(除了DIC); 聚苯硫醚是半透为水,不浸入水/含水溶液

11505268 
50张载玻片/盒

钢框架,PPS膜
(25×76mm)

16mm×45mm

1.2um

++

++

+

+++ 
D = 1.0

+++ 
D = 0

+++ 
D = 0

+++

++

适用于几乎所有的应用程序(除了DIC)

11505158

玻璃,PEN膜
(25×76mm)

19mmX41mm

2um

++

++

+

+++ 
D = 1.0

+++ 
D = 1.0

+++ 
D = 1.0

-

+

最流行的载玻片:在95%的应用程序的标准地使用

* 11505189 
50张载玻片/盒

11532910

盖玻片,PEN膜
(25×78mm)

19mmX41mm

2um

++

++

+

+++ 
D = 0

+++ 
D = 0

+++ 
D = 0

++

+

推荐染色体利差

11505151

钢框架,PET膜
(25×76mm)

16mm×45mm

1.4um

++

++

+

+++ 
D = 0

+++ 
D = 0

+++ 
D = 0

++

+

推荐MALDI-TOF

* 11505190 
50张载玻片/盒

1505191

钢框架,POL膜
(25×76mm)

16mm×45mm

0.9um

++

++

+

+++ 
D = 0

+++ 
D = 0

+++ 
D = 0

+++

++

推荐染色体利差

50张载玻片/箱

1505215(无菌)
100片/盒

大型玻璃的PEN膜
(50×76mm)

39mm×45mm

2um

++

++

+

+++ 
D = 0

+++ 
D = 0

+++ 
D = 0

-

+

对于大型组织切片(如神经生物学脑载玻片),需要可选滑架

1532860(无菌)
100片/盒

大型玻璃的PPS膜
(50×76mm)

39mm×45mm

1.2um

++

++

+

+++ 
D = 0

+++ 
D = 0

+++ 
D = 0

-

+

1600250 
5载玻片/盒

钢框架,FLUO膜
(25×76mm)

16mm×45mm


-

+

+

+++ 
D = 0

+++ 
D = 0

+++ 
D = 0

+

+++

对于荧光和DIC对比

1505172 
20蝶/盒

50mm培养皿PEN膜

直径30mm

2um

+

+

++

+++ 
D = 0

+++ 
D = 0


D = 0

-

+

对于活细胞切割; 贴壁细胞恢复耕种或分析直接LMD

1505240(无菌)
15载玻片/盒

μ-载玻片,18孔与PEN膜

30微升卷。每口井

2um

+

+

++

+++ 
D = 0

+++ 
D = 0


D = 0

-

+

1532638(无菌)
4蝶/盒

可堆叠膜环50mm培养皿,PEN膜

直径30mm

2um

+

+

++

+++ 
D = 0

+++ 
D = 0


D = 0

-

+





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