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尼康显微镜绿色激发块

2014-11-17  发布者:admin 

包括在尼康绿色激发荧光激发块组合是6包含任一的带通或长通发射(阻挡)滤波器能够通过任一窄或宽的黄色,橙色的频带选择性地分离的荧光发射,红和近红外小心平衡组合光谱区。这个交互式指南探讨了变化的激发和发射滤光器的光谱分布,以及这些的二色镜,如何影响的信号电平,整体过滤器的性能,并在设计用于在绿色区域的荧光团的激发的组合图像的对比度。

教程初始化与随机选择的荧光检体中出现的标本图像窗口和带通发射(Cy3标记 ;在所显示的绿色激发滤光片组合频谱轮廓缺省)滤波器组谱概况图。将合并的过滤器的透射和反射光谱被叠加在用于标记的样品(荧光光谱曲线中不包含自身荧光植物标本)的吸收绿色荧光团的吸收光谱和发射光谱。荧光团的吸收光谱示于使用褐色填充的教程,而相应的发射光谱表示用灰色填充。由指定的过滤器组合的波长特性过滤器设置滑块将显示在本教程的右下角的角落的黄色框。这些值被不断地更新作为滑板平移由左到右。

为了操作的教程,使用过滤器设置滑块可用于绿色激发各种过滤器组合之间进行转换。当滑块从左向右平移,激发和阻挡滤光片的光谱分布,以及该二色镜的,被修饰以模拟变化的光谱图。需要注意的是连续变化的光谱曲线,但并不意味着任何过滤器的组合是可能的,也不是单独的过滤器设置可变的(无物理变化的过滤器)的问候的光谱曲线。的选择的滤波器组之间的频谱分布的变化简单地用来帮助建立在每个光学块中使用的过滤器的组合之间的关系。

个别过滤光谱(激发,发射和二色镜),可以添加或删除的过滤器设置光谱范围选择或取消选择相应的复选框,图形下方的曲线图。此外,该荧光团的吸收光谱和发射光谱可以被添加或与一组类似的复选框(除去谱截面)。检体图像同时改变与过滤器配置文件以反映变化由改变到由滑块的翻译所产生的过滤器的组合产生的对比度和信号电平。新的标本可以在任何时候选择使用选择的样本下拉菜单,用来标记选定样本的荧光基团直接列在菜单框下方。在许多情况下,将样品粘有两个或更多的荧光探针以证明荧光带通和长通屏障(发射)过滤套的选择性分离。

尼康绿色荧光滤光片组合包括510和560纳米的带10,25,30,和50纳米的通带宽度轮廓(包括窄,中,宽激发带)之间的激发波长范围内。三组合的使用相同的二色镜(565纳米),而其它三个具有较高的波长截止点的值(570或575纳米)的反射镜。两个六种尼康绿色激发滤光片套结合带通阻滤波器具有60和75纳米的带宽。

两者的尼康绿色激发滤光片套结合的带通发射(阻挡)滤波器旨在减少或消除从荧光团发射红光或近红外光谱区中的样品标记有多个探针的干扰。在G-2E / C组结合了狭窄的激发带(25纳米)与60纳米的发射带通。Cy3标记的组合(尼康的成员HYQ滤波器组)包括类似的组件,但具有更宽的带通的激发和发射滤波器(30和75纳米,分别地),并用二色镜切口上的570纳米的波长相比为565纳米的价值G-2E / C组。既利用带通发射滤波器的套适于与四甲基罗丹明异硫氰酸酯(用TRITC)和Cy3标记,具有590-650纳米的带通范围内的G-2E / C组和573-648纳米的Cy3标记的组合。使用所产生的图像的Cy3组具有更多的黄色外观,体现的发射带通到较低的波长的扩展,并且图像是明亮一些由于从更宽的带通值产生的更大的激发和发射能量。

尼康显微镜G-1AG-1B滤波器组合具有非常相似的光学元件,并且可以被认为是本质上可互换的。其主要应用是汞弧光放电灯供选择的546纳米的绿光发射线。两者都配备有窄10纳米的通带激发滤波器(541-551纳米),以尽量减少自体荧光,但在他们的二色性反射镜和屏障(发射)滤波器的截止点的波长有所不同。在G-1A组有二色镜切对575纳米的波长,加上580纳米(切上)的发射滤波器。在G-1B滤波器组采用低波长二色镜(565纳米)中有较高的发射波长过滤器(590纳米)的组合。镜和发射滤光片波长值之间的增加的波长间隔为G-1B组相比,G-1A可能导致与一些荧光染料显著图像的差异。此外,较高的发射滤波器切上不包括黄色的波长和导致更偏红的图像外观上与G-1B滤波器的组合。

考虑到标准的绿色激发滤光片组中,G-2A采用组合激发滤波器,宽50纳米的通频带(510-560纳米),涵盖最绿色的光谱区域。在长通屏障过滤器通过从一个大的范围内,在波长超过590纳米的截止点发出(橙色通过近红外线)的荧光发射。在所用的二色镜的G-2A组具有565纳米的截止波长。类似的过滤器设置,G-2B组合采用相同的激发滤光片(50纳米带通)作为G-2A,但有一个10纳米的波长更长的二色镜切割上(575纳米),再加上一个长通屏障过滤器是由20纳米偏向红色光谱区域,以610纳米。与所产生的图像的G-2B组具有比从较暗的背景的G-2A,并且还出现更偏红由于增加了排放切口上的波长,其中不包括更黄橙色发光。

尼康绿色激发滤光片组合规格

滤镜套装描述

激发滤光片(nm)

双色镜 (nm)

二次滤光 (nm)

备注

G-1A

546/10
  (541-551)

575 (LP)

580 (LP)

Narrow Excitation Band
  Longpass Barrier Filter

G-1B

546/10
  (541-551)

565 (LP)

590 (LP)

Narrow Excitation Band
  Longpass Barrier Filter

G-2A

535/50
  (510-560)

565 (LP)

590 (LP)

Standard G Set
  Longpass Barrier Filter

G-2B

535/50
  (510-560)

575 (LP)

610 (LP)

Darker Background
  Longpass Barrier Filter

G-2E/C

540/25
  (528-553)

565 (LP)

620/60
  (590-650)

Narrow Excitation Band
  Bandpass Barrier Filter

CY3

545/30
  (530-560)

570 (LP)

610/75
  (573-648)

Medium Excitation Band
  Bandpass Barrier Filter

表1
  • G-1A -G-1A为绿色波长的激发滤光器的组合被设计为具有窄的激发带通,以减少自发荧光和最小化样品的辐射暴露。的长通屏障(发射)滤波器能够从黄色,橙色和红色发射具有在中心的绿色波长区域显著吸收荧光团发射的信号。

  • G-1B -G-1B滤镜组合也有类似的组件配置文件的G-1A组,结合了狭窄的激发带通,以减少自体荧光和试件破坏,但具有不同的二色镜和发射滤波器截止波长上。切到更长的波长的发射滤波器的移位产生的,由于黄色发射的增加的阻挡出现偏红的图像。

  • G-2A -G-2A滤波器组合被配置为在标准的绿色过滤器块中,具有宽的激发带通应用到大量的荧光团通过绿色波长激活的。的长通发射滤波器允许检测所有荧光波长长于黄色光谱区域。

  • G-2B -G-2B滤波器组合设计具有相同的励磁特性的G-2A滤波器模块。然而,较高的二色镜和发射滤波器截止波长上,在G-2B组产生具有较深的背景和颜色转向红色的图像。

  • G-2E / C -G-2E / C滤波器组合设计与许多流行的荧光探针是在多标记实验中使用的最佳性能。一条狭窄的激发带通提供了选择性激励,而带通滤波器的排放减少了从荧光发射红光和近红外干扰。

  • Cy3(HYQ) -该Cy3的绿色激发滤光片组合在结构上类似G-2E / C组。然而,在一个较宽的激励频带的发射带通和展宽到包括低波长的光,通过所产生的图像的Cy3过滤块在某种程度上更明亮,反射更多的黄色光谱区发射的检测。