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尼康显微镜相差和DIC显微镜的比较

2014-11-14  发布者:admin 

微分干涉对比(DIC)和相差显微镜之间最根本的区别是在其上的图像是由互补的技术形成的光学基础。标本由这些对比增强方法研究产生往往是完全不同的外观和性格时,客观地比较图像。这种互动式教程探讨很多相衬和DIC显微镜拍摄的图像之间表现出的异同。

本教程初始化一个随机选择的样本出现的标本图像窗口和对比度机制滑块也设置为一个随机位置。为了操作的教程,使用鼠标光标移动到翻译对比度机制的滑块之间的相位对比图像(滑块移到最左边)和DIC图像(滑块移到最右边)位置。当滑块从一个对比度机构移动到另一个时,该图像改变字符并开始获取新的对比机制的属性。不同的样品可以从调色板中使用的选择中选择一个标本下拉菜单。

相差显微镜产生的图像强度(振幅),该变化作为试样的光程长度数量级的函数值,具有非常密集的区域(那些具有大的路径长度)出现比背景暗。可替换地,试件具有相对低的厚度值的功能,或折射率小于周围介质,在标准(正)相造影剂的灰色背景重叠时,呈现轻得多。

这种情况是相当不同的对微分干涉对比,其中的光路长度的梯度(在效果上的变化的波阵面的方向的速度剪切)主要负责对比度。在路径长度陡梯度产生优异的对比度,和图像显示的伪三维浮雕阴影,这是DIC的技术特性。具有很浅的光路的斜坡,如那些在延长,扁平的样品观察到的区域,产生微不足道的对比度,经常在相同强度水平作为背景出现在图像中。

除了在对比的形成机制的差异,DIC和相衬图像的不同之处的一些其它特征。图1所示是在比较中DIC和相衬捕获标本几个数字图像。一个人类口腔上皮细胞暴露于在DIC的上表面上的核和众多的细菌是在图1(a)所示,与相同的视场与图1中相位对比(b)所示。相衬图像设有蜂窝周和细胞核周围明显的晕圈,其不存在于所述的DIC图像。光学切片的DIC调查(未示出)表明,该细菌是存在于该沐浴在周围介质相对于躺在小区的下侧的膜表面上。这一事实不能明确相衬确定。

在图1(c)中,鼠肾组织成像,用DIC厚部分显示的细胞封装在细管的一个包。在同一地区的相衬图像(图1(d))的混乱及由相的晕圈的聚焦平面以外的存在的干扰。然而,一些蜂窝晶核出现的相位对比图像,这是没有区别的DIC中可见。相对的高放大视图Obelia在DIC和相衬息肉稠干perisarc如图图1(e)示出了和图1(f)所示,分别 在DIC时,(图1(e))的环状结构出现半球形内部的光线从干发出。另外,粒状颗粒的茎结构中可见,但解剖细节在很大程度上是不确定的。相衬图像(图1(f))的是由周围的圆环光晕和杆内混淆。

微分干涉对比超过相差的主要优点是,利用仪器满数值孔径没有相位片或聚光器的环的掩蔽效应,这严重限制了聚光镜和物镜孔的尺寸的能力。主要优势在于提高轴向分辨率,特别是相对于所述的DIC显微镜的大孔径尺寸,以产生良好的高分辨率图像的能力。