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尼康显微镜选择荧光蛋白的双标记实验

2014-10-13  发布者:admin 

通过荧光蛋白和其色移性遗传变异体显示出了广泛的激发光谱和发射光谱曲线设计使用两个或更多的同时这些独特探针的活细胞成像实验时,往往需要专门的考虑。主要关注的是从显著程度的排放而导致的谱法,荧光蛋白的组合重叠通常表现出潜在的出血,经过文物。这种互动式的教程探讨匹配的荧光蛋白双标记的调查与问候光谱带宽和重叠,激发效率,发射窗口的尺寸,并且需要设计合理的实验等参数。

教程初始化与从荧光蛋白(CFP蔚蓝色和HcRed - 串联)中出现的光谱曲线窗口重叠在汞弧光放电灯的发光光谱的一个有用的组合的吸收和荧光发射光谱图。还包括在初始化时该窗口是适当的荧光团的二色性反射镜的配置文件,以及用于发射滤波器带宽配置文件建议的出发点。鼠标光标可用于拖动沿着光谱曲线窗口的波长轴的灰阶发射滤波器带宽的界限来确定最佳位置。上为每个发射滤波器的控制的右手侧的双滑块组合或箭头按钮可用于调整带宽,中心波长可以用左手箭头按钮来改变。拖动左边的滑块也意味着整个图形的带宽配置,同时拖动右边滑块增加或减少的带宽大小。虚拟发射器的电流的中心波长和带宽的值被连续地更新,并且在红色标记上方的滑块显示。渗出到(如果有的话)的比例是不断更新的每个信道和光谱曲线窗口的下方显示。 

尼康显微镜该二色镜滑块控制这些元素的截止波长曲线的位置,并且可以使用相邻滑块的颜色编码的单选按钮的每个信道之间进行切换。同样,汞灯的光谱分布可以通过停用激励源复选框被关闭。 (默认:水银弧光灯)吸收(ab)和发射器(EM)频谱的曲线可以通过从上方的照明源头黄色显示窗的框去除勾选被禁用。当激光源被从照明下拉菜单选择,基于在激光波长处的摩尔消光系数的激励效率百分比显示在照明显示窗口上方的绿色方块。激光线,绘制颜色近似的频谱配置文件窗口的波长,可以通过禁用激励源复选框被停用。为了保持当前的教程的参数(显示的激发和发射滤波器的配置文件等),而经由探针或照明源的列表进行切换,在维护状态复选框可以启用。新的荧光蛋白类可以使用组单选按钮的光谱曲线窗口右侧选择随选择的探讨下拉菜单。 

在计算本教程的值所使用的吸收光谱和荧光发射光谱记录在受控条件下进行标准化,仅供比较和显示的目的。在实际荧光显微镜调查,光谱曲线可能会因环境的影响,如pH,离子浓度,溶剂的极性,以及在局部探针浓度的波动而变化,因此,可能不同于实验条件下实际观察到。