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奥林巴斯显微镜摄影黑和白平衡

2014-10-09  发布者:admin 

  用光学显微镜拍摄的数字图像的整体色彩是不仅依赖于波长的可见光透过或样本反射的光谱,但也对照明的频谱内容。 彩色数字摄像系统,使用电荷耦合器件( CCD )或互补金属氧化物半导体( CMOS 图像传感器), 白色 和/或 黑色平衡 (基线)的调整往往是必要的以数字图像中产生可接受的颜色质量。

与随机选择的样本图像初始化教程,在奥林巴斯显微镜下拍摄的,出现在左边的窗口标题 标本图像 每个样品的名称包括在括号中,一个缩写,指定用于获取图像的对比度机制。 下列术语使用: (FL) ,荧光; (BF) 明; (DF) ,暗视野; (PC)相差 (DIC) ,微分干涉对比; (HMC) 霍夫曼调制对比度,和 (POL) 偏光。 参观者注意捕获的标本使用各种技术在光学显微镜不同的表现,在教程中的图像处理。

相邻的 标本图像 窗口是 平衡的图像 窗口,其中显示的图像后,黑或白平衡校正算法已被应用到的样本图像。 为了操作的教程,请选择 白平衡 黑色平衡 从单选按钮 平衡模式 在这个教程的窗口底部的清单。 下一步,选择 点的选择 矩形选择 区域选择方法 列表 如果 点的选择 选择,将鼠标指针放置在一个地区,应该出现的白色或黑色的图像,点击按钮,应用相应的算法对样本图像。 平衡的图像 窗口会自动显示处理后的图像与白色或黑色的校正。 选择 矩形选择 单选按钮将使一个特定区域的选区在图像的校正算法将应用。

如上所述,数字图像的色彩平衡是由CCD或CMOS图像传感器采集的光谱波长的影响很大,无论传感器被安置在一个照相机,望远镜,激光台,或显微镜。 彩色数码相机,使用这些固态器件,一系列的平衡的调整往往是必要的为了生产出可接受的彩色图像,符合照明光源的色温。

人的眼睛是很容易适应不断变化的照明条件下,为了确定一个白色物体白即使周围的亮度和颜色的温度波动。 相反,数码相机需要仔细推敲的红,绿和蓝(RGB)的调整,信号的振幅,以产生类似的结果。 大多数数码相机需要测量和颜色的温度以确保白色物体的记录为白色的调整,以保证其他颜色也接近可接受的范围内。 这个过程通常被称为调节白平衡,是许多数码相机的软件和/或硬件选项。

为了举例说明点,色温度的一个典型的例子(或色彩平衡)在数字图像与光学显微镜的错误,如图1所示。 一个明场图像 地龙蒺藜 (共同的蚯蚓)拍摄的显微镜之前和之后的白平衡调节的查找表。 在调整白平衡的设置(图1(a)),图像有一个整体的绿色铸造,软化染色和苏木素染色和面具的背景颜色(它应该出现的白色或浅灰色)。 显微镜的查找表的白平衡调整后,明亮的染色的颜色是没有任何演员和揭示组织内均匀分布(图1(b))。 此外,背景已转移到一个很轻的中性颜色,通常观察到当成像的标本在明场照明。

标本接手区应慎重选择白平衡测量,因为在试件文物会导致在白平衡测定误差。 在较暗或高度着色的标本,相机的黑色平衡应该设置,如果可能的话。 的标本或盖玻璃的存在或不存在的折射率的差异可能导致球面像差,从而影响白平衡测量(虽然一个最小的程度)。 此外,生物染料出血也可以在安装介质引起颜色的变化,导致在白平衡校正误差。 只要有可能,使用字幕( 矩形选择 )工具选择白平衡测定面积最大。 这使软件平均白平衡计算在一个更大的像素数会产生更多的可接受的结果。 在某些情况下,尤其是当只有一个像素被选中,整体的白色或黑色的平衡测定可以被破坏,导致不适当的调整图像。

最好的白平衡校正往往是实现数码相机时,指着相反的物体的颜色白色卡片,或试样从显微镜阶段完全除去,达到均匀照明的背景。 一个标本的地方设置白平衡可以使图像获得色,这会严重影响图像的对比度和偏离的对象或标本的颜色效果。 此外,在偏振光图像,微分干涉相衬,荧光,或其他的对比度增强技术可以在色彩平衡的调整更加困难。 这通常发生在背景假设由于摄像机和显微镜的光学配置的色彩。 例如,当一个一阶延迟板插在偏光显微镜偏光器和分析器之间,整个视野呈现红色,使黑或白平衡调整非常困难。 奥林巴斯生物 显微镜 微分干涉对比观察到类似的效果。 在许多情况下,黑色的平衡值是建立更容易,从而导致更清晰的图像与黑色的背景和一个显着的整体图像对比度的改善。

现代消费和科学CCD数字相机系统通常包括参考电路,包含一个数字信号处理器(DSP)设计的电子调节的传感器记录图像的颜色平衡电路。 处理电路提供了一系列的查找表,这是用软件来调整红,绿,蓝,为信号到达正确的色彩平衡,为一个特定的光照强度和色温。 通常,查找表将包含有关卤钨灯信息(在各种颜色的温度),汞和氙弧放电燃烧器,闪光灯管,发光二极管,其他普通照明源之间。 的RGB系统是一种主要的颜色模型用于指定和控制相机和软件代表颜色。 白色是结合三种颜色(红,绿等零部件生产,和蓝色)在百分之100的水平。 色温度的调整,可以很容易地通过调整一个或多个这些原色的强度水平。

除了相机系统,电脑或视频监视器用来查看图像往往需要一种色温为匹配的数字摄像头采集的颜色信息,相应的调整。 许多计算机软件包中包含一个 白色的点 算法,使软件相匹配的色温调整,但硬件必须经常调整好。 计算机显示器通常有外部的调整,允许用户对色温的几种选择之间切换,范围从9000 K到5000 K,这些设置可以更改以匹配标准的观看条件,以确保在屏幕上看到的图像是真正代表一个由摄像机捕获的。



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