设为首页 | 添加收藏 |sitemap |百度地图 |
货真价实 坦诚无欺
新闻资讯

徕卡显微镜EM ACE600电子束

2014-09-07  发布者:admin 

甘油喷雾/低角度旋转遮蔽是在生物学用于可视化的结构,得到与其他技术不足等相反,制剂技术,由于其直径小。此方法通常用于标本,其中包括与卷曲螺旋结构域或DNA的蛋白质。

样品制备包含三个步骤:首先,标本的小水滴悬浮在一个缓冲区包含30%甘油和乙酸铵缓冲喷洒到新鲜贴近,干净的云母片表面。 第二步,样品转移到高真空蒸发器:这个工具允许存款薄层的电子致密物质(通常是Pt、W或非盟)在低角度到样品。 蒸发物质积累主要在提高样本,从而提供了对比。 随后,一层支持C是蒸发到标本提供支持。 在第三步中,副本形成脱离的云母和安装到EM电网教具电子显微镜检查。

徕卡EM ACE600配备Pt / C和C电子束蒸发,第二步可以完全自动化:从样本已经转移到收件人的高真空蒸发器,直到程序结束,仪器充分控制真空,标本的位置相对于金属/碳源和沉积材料的厚度。

编程序列

两个电子枪支使用在这个准备的过程中,这两个需要脱气,以避免相当退化的真空由于加热在当下的实际蒸发开始。 而不是两个后续德加/泵/蒸发周期Pt / C和C,它是首选先德加两枪,然后泵需要相当长的时间来达到一个好的过程真空蒸发材料。 一个自动序列正在这里描述实现该方法。 Pt / C枪安装在正确的端口,C枪在左边。

材料

  • 材料使用Pt标准定义的“白金德加”设置,50 W脱气的力量,和120秒脱气。
  • 材料使用C标准设置“碳德加”的定义,75 W脱气的力量,和300秒脱气。
  • 两种材料“铂没有德加”和“碳不德”具有相同的属性定义为原始材料,但脱气是停用。

流程

  • 过程“脱气Pt / C”旨在德加Pt / C枪只是编程使用的材料“白金德加”。 这一过程将开始为1.0×10 mbar,蒸发低30 W的力量,和目标厚度为0.0 nm打开快门后立即终止。 设置阶段地位因此过时了。
  • 脱气过程”C”旨在德加C枪只是编程使用材料“碳德加”。 这一过程将开始为1.0×10 mbar,蒸发低30 W的力量,和目标厚度为0.0 nm打开快门后立即终止。 设置阶段地位因此过时了。
  • 过程“阴影Pt / C”程序使用以下设置:材料“铂不德”,功率100 W目标,目标厚度2.0 nm,真空< 2.5×10 mbar、舞台在-54°倾斜(对应于5°相对于枪),最大工作距离,旋转5(最大值)。
  • “支持度”是编程过程使用以下设置:材料“碳无德”,120 W targat力量,目标厚度6.0 nm,真空< 2.5×10 mbar,舞台上20°倾斜(相对于水平),最大工作距离,旋转5(最大值)。

序列

  • 一个序列组成的“脱气Pt / C”,“脱气C”,“阴影Pt / C”,“支持度”准备。

准备

在实验之前,Pt / C和C枪清洗彻底,细丝的目标和建立根据手册。 Pt / C枪是安装在真空室的正确的端口,C枪在左边。 佬司的仪器成立(低角度旋转跟踪)阶段和石英晶体在侧卧位。

130µg /毫升dsDNA长度1010完全(对应343海里)在喷洒稀释1:20缓冲区(100中毒/ l醋酸铵,30%的甘油,pH值7.6)。 小水滴喷洒喷雾装置中描述到新开辟的云母片表面大约2×2毫米大小和安装与双面胶带在50毫米圆形滤纸。

喷洒后,对滤纸样品立即转移到随时准备徕卡EM ACE600和疏散。 上面列出的顺序与被处决,商会是在完成时自动排放。

滤纸上的副本被从真空室和转移到潮湿的cham-ber,制成的塑料盘子,封口膜(使样本变湿),和湿滤纸。 促进超然的复制品,他们孵化在烤箱45°C 30分钟。

随后,副本是浮在表面的蒸馏水在一个白盘子里,挑了一个un-filmed 400目铜网格,ddH转移到另一个盘 O所有残余有机物的去除(甘油),拿起另一个网格。 多余的水从侧面涂抹和技巧的滤纸的钳,样本被风干。

空气干燥的副本在透射电子显微镜下观察到在80千伏,感兴趣的区域可以通过晶体的残留盐形成的中心干水滴中描述。 图像记录用CCD相机的像素大小0.373 nm /像素。

 

图1:如在透射电子显微镜中的文本描述和可视化制备的低角度旋转遮蔽的DNA。单个分子是清楚可见的,并显示出良好的对比度。使用斐济,340纳米的平均长度测量组(n =8)。 (下图)在较高的放大倍数图像允许评估对比增强金属的粒度。杆(顶部,底部)= 100纳米