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奥林巴斯显微镜激光扫描共聚焦显微镜模拟器

2014-08-27  发布者:admin 

 也许在光学显微镜在过去十年中最重要的进展一直是细化使用的主流激光扫描共聚焦显微镜LSCM) 技术的改进合成荧光探针和转基因的蛋白,广泛的激光光源耦合到声光可调谐滤光器的高度精确控制,和更先进的软件的结合包裹与现代高性能计算机。此交互式教程探讨了多激光荧光法和微分干涉对比 (DIC) 共聚焦成像的奥林巴斯 FluoView FV1000 共聚焦显微镜软件接口作为一种模式。

教程初始化 (出现在实时视图窗口左侧上部的教程) 随机抽取标本被沿横向x-y平面的每个像素,20 微秒速度扫描和探测频道正在设置非常接近与同时扫描在所有三个渠道的最佳值。扫描速率受控制扫描速度滑块,提供一系列的每个像素的 2 到 200 微秒。成像深度轴向 (z) 的方向被调整决定由每个试样的厚度范围,根据z 轴位置滑块。在初始化,每个通道对应目前在标本的荧光激活,并且能够用于成像的特异性探针进行标记。透射光通道 (TD) 是默认关闭的。激光器是预先分配 (和固定的) 按以下顺序在通道: 氩离子 (488 纳米)-氦-氖 (543 纳米)-通道 2、 通道 1 和氦-氖 (633 纳米)-通道 3。TD通道产生使用氩离子激光的微分干涉对比图像设置在 488 纳米的透射的光。

为了运行本教程中,使用每个通道的高压增益,并抵消滑块通过单击箭头按钮在顶部和底部,或在任何地方 (每个包含蓝色的水平栏) 的指标框里面调整的信号水平和质量。当通道电压、 增益和偏移量的值发生了变化时,蓝色的水平栏自动调整以显示新的值,也下指标框中数值表示。此外可以通过点击自动高压按钮,为了保持恒定的信号水平时增加或减少扫描速度成比例,调整这些值。该个体的照明光源激光强度值可以控制 (通过一系列的 0%到 100%) 的滑块与毗邻每个激光激活复选框的箭头按钮。使用相应的复选框打开或关闭,也可以切换,激光器。

在任何在本教程的操作期间,试样的扫描可以通过点击停止按钮,停止和使用XY 重复按钮然后重新启动。停止按钮被激活时,自动对比度按钮 (在本教程的右上角) 变得启用快速初始设置 (也激活X 4按钮),探测器通道水平的一种做法,通常用于快速检验新的标本。可以用查找表按钮 (定位之间停止自动对比度按钮) 来改变伽玛、 强度、 对比度和伪任何的彩色通道 (当前通道颜色表示在每个通道组框的下半部分)。模拟的快速扫描的标本 (用于定位和实际显微镜聚焦的) 可以通过点击X 2X 4按钮完成。

可以通过点击VBF按钮,启动一个对话框说明选定荧光团 (列在对话框中为每个通道) 发射谱叠加在狭缝边界调整可变探测器狭缝为通道 1 和 2。调整这些狭缝的宽度是有用,流血,通过最大化荧光发射强度的同时减少。此对话框还包含启用选择障碍筛选器应用于信道 3,这样就允许用户因第三通道而异切对波长进行排放检测的下拉式菜单。通过点击重置按钮,可以恢复默认值 (由荧光组合的选择)。

本教程模拟光谱流血,通过 (也称为交叉) 到相邻探测器渠道在高光电倍增管电压和激光强度的水平。流血,通过通常可以纠正通过激活连续扫描复选框和安排通道扫描成正确的顺序使用菜单 (标本不被按顺序扫描时,此按钮停用)。例如,使用共同的荧光团: Alexa 氟 488 (通道 1)、 MitoTracker 红色 CMXRos (通道 2) 和到 PRO-3 (通道 3),每个通道可以放置在不同的组,流血,通过尽量减少。另外,通道 1 和 3 可以放在一个组中,而通道 2 扫描在不同的组来实现类似的结果。也可以通过不同的光谱检测频道和屏障滤狭缝宽度控制流血,通过程度,如上文所讨论。在任何时候使用选择 A 标本下拉式菜单,新标本可以将加载到教程的窗口。