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尼康显微镜相差对齐方式

2014-07-04  发布者:admin 

 相衬显微镜的仔细比对是必要的,以便产生最大的反差效果,而不会引入降解标本外观或导致错误的解读文物。本互动教程将检验标本的显示方式通过 (在不同的放大倍数) 目镜当聚光镜环转移入和出相位板在物镜中对齐的变化。

本教程使用初始化上右手边的教程在显微镜图像窗口中出现随机选定的阶段对比试样。毗邻此窗口是物镜的后方焦平面视图 (题为物镜后方焦平面; 在左边) 说明的接近度物镜相板和聚光镜环。默认情况下,物镜相板和聚光镜环光锥不对齐,必须使用翻译 XY 平移滑块重新定位。翻译这些滑块,使操作者调整聚光镜环光锥的固定物镜相位板的位置。当两个环形居中时,得到最大可能样本的对比。

作为翻译滑块的替代方法,可以用于鼠标光标拖动窗口内的聚光镜环图像,以便可以在周边的物镜相板内任意位置定位。新标本可以将加载到本教程中所使用的选择 A 试样拉下菜单,并可以使用选择物镜菜单中更改的物镜的放大倍数。选择新的标本或物镜时,每次本教程自动重新加载的聚光镜环和物镜相戒指随机偏差。

在查看时固定的相位环在物镜中使用贝特朗 · 镜头或一个阶段的望远镜,经营者然后可以执行对聚光镜环位置以对齐两个相位对比观察调整 (见图 1)。在图 1 中给出了是在不对中的物镜后焦平面的图像 (图 1 (a) 和 1(c)) 和后的聚光镜环和相位环已经正确对齐 (图 1(e))。也说明了在此图中的相应显示图像的查看通过目镜时 (图 1 (b)、 1 (d) 和 1(f)),这表明标本显微镜是未对齐的显示方式 (图 1 (b) 和执行和仔细地对齐 (图 1(f)) 根据下文所述的过程。

在试图使一个显微镜相衬观察,检查仪器仔细,以确保所有物镜包含相位板,并牢固地安装在物镜转换器。物镜也应在他们的安排上物镜转盘,从低到高的放大倍数,以尽量减少一聚光镜环和另一个之间的转换频率顺序排列。经常在 10 x 和 20 x物镜,分享共同的聚光镜环、 做 40 x 60 x 物镜。高度修正的物镜,如色差设计用于油浸泡,经常有类似数值孔径和利用相同的聚光镜环在更广泛的放大倍数 (100 x 40 x)。低功率相衬 (4 x 和 (5) 通常需要摆动镜头聚光镜和专门的聚光镜环。

聚光镜环形板上也应该按顺序安排,与环为较低的放大倍率物镜设计和程序设计的最高放大倍数的一个开始。一般情况下,整个放大倍率范围可以覆盖着三个或四个单独的环形空间。如果采用通用的聚光镜,位置最低放大倍数环 (例如,菲律宾Ph1) 右侧的明视场插槽和其他板按顺序相邻的插槽中。通常情况下,试样必须审查在明视场之前或之后相位对比观察,所以这项安排将会提供一个简单的工作流。

以下步骤被建议相衬显微镜的对齐方式。

  • 在载物台上放置明亮染色的标本并旋转 x 相衬物镜 10 成的光学通路在明视场照明模式。集中的标本,并关闭字段隔膜直到它进入视场的边缘。使用的聚光镜的高度调整旋钮,位置聚光镜所以个人留下的领域隔膜中关注的焦点,和使用主聚光镜为中心的调整旋钮,以确保字段隔膜居中的视野。请仔细检查显微镜配置,以确保取得了柯勒照明,和样品的是大家关注的焦点。

  • 删除染色的标本和显微镜载物台上放置一个相位的标本。在的情况下物镜标本已只有最小的光学路径差异 (可能很难想象),与一个已知的能够产生相位对比模式,高对比度的标本对齐显微镜。旋转聚光镜炮塔,直到适当的环位于中的光学通路 (Ph1或等值为 10 x 物镜)。检查以确保聚光镜环颜色代码或题字与匹配的物镜。检查聚光镜孔径隔膜杆位置,并将它移动到最大光圈的位置 (聚光镜设计阶段对比可以自动这样做)。

  • 如果显微镜配备贝特朗镜片,使用拇指控制镜头已准备就绪。或者,删除其中一个显微镜目镜,观察管中插入一个相位的望远镜。

  • 同时通过目镜或相位望远镜眯着眼睛,调整贝特朗 · 镜头或望远镜焦点眼管的重点直到相位板中,物镜是在大家关注的焦点,和聚光镜环的鲜明的形象和黑暗的中性密度材料在相位板之间的重叠,显而易见。在许多情况下,在显微镜最初将不对齐和环图像会不准确地覆盖在相位板的中性密度材料 (如图 1 (a) 和图 1(c)) 所示。

  • 找到的聚光镜环定心针 (或螺钉) 和调整环一双螺丝起子或适当的旋钮的位置,直到它是符合物镜相板 (图 1(e))。注: 不尝试调整聚光镜环的位置与主聚光镜为中心 (通常位于上聚光镜安装支架连接到显微镜) 的旋钮。这一努力很可能不会达到预期聚光镜环对齐方式和绝对会妥协应以前建立的科勒的光照条件。

  • 当聚光镜环正确居中对齐时,环的光通过聚光镜会减弱所应用到的物镜相板,降低环图像的强度的中性密度材料。因此,如果聚光镜环不当为中心,一个明亮的新月形边缘会出现毗邻中性密度材料在物镜相板 (数字 1 (a) 和 1(c))。如果环的图像不适合在相位板黑圈内,然后要么聚光镜是焦距 (和柯勒照明不成立的),或相望远镜 (或贝特朗 · 镜头) 重点并不在物镜的后焦面。在一些情况下,即使当相望远镜 (或贝特朗 · 镜头) 和聚光镜适当集中,聚光镜环图像变得模糊和出现失焦。这可能会引起低频率衍射从标本。如果发生这种情况,卸下试件从载物台和进行显微镜下的对齐方式。

  • 如果聚光镜环图像的大小从那物镜相板显著不同,检查看看如果错了环板被安装在聚光镜 (最可能的原因)。另一种可能性,如果高数值孔径油浸物镜的雇用,是聚光镜前端透镜元件为了沉浸。在这种情况下,它可能是很难 (或不可能),叠加上没有一滴油的聚光镜镜头和显微镜幻灯片之间 (或物镜和盖玻片之间) 相位板的聚光镜环。

  • 当聚光镜环和物镜相位板正确对齐,图 1 (e) 所示的图像应出现在相位望远镜或目镜 · 贝特朗 · 镜头中的地方。在这一点上,在显微镜的配置正确,可以观察的试件与相位对比照明。

  • 替换阶段望远镜的目镜,或旋转贝特朗 · 镜头出的光的通路,并检查标本。背景应该出现中性灰色的颜色 (取决于物镜的相位板的中性密度) 与可见在高对比度的标本。

一旦为相衬,已调整显微镜,它一般将举行相当数量的物镜/环形空间的变化,其浓度,但应定期检查,以确保正确对齐。如果显微镜开始滑落不对齐,出现在目镜中 (或在计算机监视器上) 的图像会出现越来越多像那些观察明视场照明。