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奥林巴斯显微镜光染色与DIC显微镜

2014-05-05  发布者:admin 

 通过引入双折射补偿板成一个微分干涉对比(DIC)的显微镜的光路,被超过的灰度值的一个有限的范围内以其他方式呈现透明的标本可以转化通过称为光学染色的技术中,以显示多种颜色的。 这种互动式教学探讨如何改变偏见迟缓的量会影响染色的标本图像实现的外观和水平。

教程初始化与随机选择的DIC图像中出现的具有施加到光学系统中的小偏差的延迟值(1-第二十一个波长)的标本图像窗口。 要操作教程,为了在试样图像产生高阶干涉色翻译偏置迟缓滑块移动到较高的值(在右边)。 该滑块有1/20和迟缓的全波长之间的工作范围。 新的标本可以通过选择在选择样本下拉菜单中选择相应选项进行检查。

在微分干涉对比正常和非常波阵面之间的偏置相位差可以通过使用补偿器的最初目标是定量的相位差测量装置和对比度增强元件为偏振光显微镜来操纵。 补偿板赋予更大的控制,用于调整试样的细节的对比度相对于背景亮度和颜色值,并且还使波阵面之间的偏差值的更精确的调整。 这些双折射元件也经常用于透明的标本,其通常呈现在灰度值的有限范围内的光的染色。

当一个标准的客观诺马斯基棱镜沿着超越四分之一波长,这两种试样的特征和背景的路径差的显微镜光轴翻译获得的牛顿干涉色类似于那些在偏振光显微镜观察到的光谱。 样品和背景成为光学上的彩色颜色的该迁移通过一系列的灰度值,通过白色,黄色,红色,蓝色和更高阶的过渡。 光染色产生的戏剧性和精美的彩色图像,但仅限用于科学应用。 通常,最佳的标本对比度仅限于二十分之一到的相位差的四分之一波长的范围内。

补偿器可插入任一目标棱镜和分析仪或偏振器和冷凝器的棱镜之间的DIC显微镜的光学路径。 许多显微镜有位于中间管或台下聚光住房为此而设计的一个插槽。 另外的一阶补偿器(通常称为全波一阶红色板)具有相位差值等于全波长在可见光(约550纳米)的绿色区域,引入的干扰色的光谱,以样品和背景。 用在这里的补偿器,绿色光不能穿过分析仪,因为它出现从相位差板的线偏振光与电场矢量具有相同方向的偏振器。然而,在红色和蓝色光谱区域的波阵面会遇到比波长小于相位差,成为椭圆偏振光,使他们能够通过分析器传递组件。 其结果是,这些颜色成为混合以形成品红色背景中的视场。

因此,当试样中的白色光用微分干涉对比光学和一阶补偿器观察到的,而图像的对比度被显示在的二阶蓝色和一阶黄色的颜色(取决于方向)的背景显示品红色牛顿干涉色光谱。 有了补偿,偏置迟缓小的变化由诺马斯基棱镜(或旋转偏振镜以脱Sénarmont补偿器)产生的具有大的路径长度梯度结构观察快速变化的干扰色的翻译得到的。 这种技术是用于将彩色(光染色),以具有高折射率的边界,如细胞膜,细胞内的大颗粒,纤毛和细胞核的区域是有用的。 由试样的特性所显示的干涉色可被比作一个米歇尔 - 列维颜色图表上的值,以获得的光程差的估计值。

如图1所示,是已被光学地染色,并通过DIC光学技术呈现在伪三维浮雕几个透明标本。 图1(a)给出了预测在栉鳞鱼鳞的边缘,而犬钩虫( 钩虫 )的嘴的特点是在图1(b)所示。 大豹蛾(Ecpantheria scribonia)五颜六色的翅膀上的鳞片列于图1(c)。 在所有情况下,利用Nomarski棱镜被穿过显微镜光轴转换为偏置相位差值超过一个完整波长。 虽然这些图片没有透露有关该标本隐藏的科学信息,他们确实有提前DIC的光学显微镜的技术,因为科学和艺术之间的桥梁合法的潜力。

上装有一个去Sénarmont补偿器用于引入偏置到一个微分干涉对比光学系统的显微镜,一个全波相位差板可以被添加到光学染色用牛顿干涉色的样品,并提供有关路径的差异更加定量的信息。 去Sénarmont补偿器经常采用在DIC显微镜取得偏置相位差的精确测量的水平,但该设备也有用以监测光学部件的对准。 在视频增强DIC(VE-DIC)的显微镜,德Sénarmont补偿器通常用于优化在标本细节对比度在于下面的显微镜的分辨率极限。