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奥林巴斯显微镜,荧光和生物发光蛋白

2013-12-31  发布者:admin 

 生物体的广谱能够通过生化机制,包括萤火虫,水母和某些细菌发光的。 一些这些生物体的发射光通过吸收特定波长的光,而其他通过消耗身体内储存的能量发射光。

荧光蛋白通过吸收和重新发射的光的能量发出荧光。 水母,珊瑚,海葵和某些细菌有自己的身体内这种蛋白质。 另一方面,生物发光来源于体内的化学反应;实例包括夜光属的萤火虫和物种。 发光物质要么是位于细胞(萤火虫和夜光 )内或分泌到外部(Cypridinacea)。 虽然蛋白质参与这些化学反应,该蛋白本身并不直接发光。

两个荧光蛋白和生物发光被广泛应用于医学和生物学研究中的应用。 成千上万的材料已经收集到的领域。 虽然只有少量的蛋白质,已被提取这样的研究,蛋白质已可通过化学合成或基因工程。 是绿色荧光蛋白(GFP)及其变体的基因的市售的和被施加在细胞生物学和分子生物学领域。

荧光蛋白

  • 绿色荧光蛋白和变体 :BFP,CFP,GFP,YFP和DsRedFP
  • 藻胆蛋白 :B-藻红蛋白(B-PE),R-藻红蛋白(R-PE),和别藻蓝蛋白(APC)

天然存在于水母的绿色荧光蛋白,在第65个至第67个位置的氨基酸已发现通过紫外线或蓝色光激发以发射荧光(DsRed的是在海葵找到)。 GFP基因用于研究在细胞水平上通过其在细胞中的表达,以可视化或追踪活动。

藻胆蛋白是从细菌和藻类获得的。 这些蛋白质含有共价连接荧光团。 样品标记有藻胆蛋白,主要用于流式细胞仪,也可以在显微镜下观察。

激发和发射特性 
荧光蛋白的
荧光蛋白  
波长(nm)
发射 
波长(nm)
GFPwt(Wild Type 395/475 510
ECFP 433 475
EGFP 488 507
EYFP 513 527
DsRed 558 583
B-PE 545/565 575
R-PE 410/545/565 578
APC 650 660
表1

生物发光蛋白

  • 水母
  • 荧光素-荧光素酶

间的生物发光蛋白,水母发光蛋白和荧光素是两种最常用的生物学研究。 水母发光蛋白是一种生物发光蛋白复合物分离自水母和钙离子浓度的测定中使用。 它包括蛋白质apoaequorin和潜伏发光分子。 当钙离子结合的水母发光蛋白,复分解成apoaequorin和发光分子,其发出蓝色光(约466纳米)。 与使用荧光染料的探针的测量,使用水母发光蛋白的钙离子浓度的测量不需要激励和不受自体荧光。 合成apoaequorin是目前可从几个来源。 该apoaequorin基因也可以通过其在线粒体中表达所用的钙离子浓度的测量。

荧光素是从萤火虫获得的生物发光分子,它发出的光的发光时,它是由一种酶(蛋白质)命名的荧光素酶(波长长达560纳米)的氧化。 因为ATP是不可或缺的萤火虫的萤光素 - 荧光素酶反应,该反应被用于一个ATP检测试剂盒,具有非常高的灵敏度。 这样的ATP检测试剂盒都可以买到。 荧光素酶基因也被分离,并且可以在细胞内被表达。