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徕卡显微镜,激光显微切割(LMD)和花式应用

2013-12-12  发布者:admin 

新的和深远的应用最近已开辟了激光显微切割领域。除了常规的解剖,徕卡激光显微切割系统(LMD)是一个很好的工具,标记相关的结构,提供非常具体的激光操控选定的区域。 这种激光打标功能的应用,如CLEM,NanoSIMS以及在活细胞扇区是有用的。 下面简要概述显示了如何这样复杂的挑战可与LMD组合来掌握。

CLEM(相关光学和电子显微镜)和LMD - 标结构的快速和精确追踪

越来越多的蛋白质和细胞器研究在细胞生物学的复杂性,有时需要不同的成像方法的组合。 部分CLEM方法尤其夫妇技术,如光学和电子显微镜。 的主要目的是显示用光学显微镜在电子显微镜水平,即在活细胞的动态活动与超微结构和三维信息的相关获得的图像。 使用LMD中,参考坐标系统可以产生一个培养基材样品制备过程中,使标记的细节快速和精确的位置的表面上。 这个过程是在图1所示的令人印象深刻。

图。 1:参考网格压印到细胞培养基材。 (一)参考网格的激光显微切割显微镜的计划。 该图案化基板ACLAR用激发滤波器BP三十零分之五百四十五(B)的落射荧光显微镜下成像,BP四十零分之四百八十○(C)和BP四十分之三百六十〇(D)。 电网荧光比标签蛋白的GFP信号非常微弱。(E)参考网格是可见的明场和用扫描电子显微镜(F)。 (G-I)由于ACLAR的融化,正面和负面的图案被印如通过扫描EM(G)。 因此,聚合,除去培养剂(H)后,该模式将显示为阴性和阳性痕迹留下明显漏洞(我)在第一个EM的部分。 (J)的图片的预规则化衬底安装到金的镀活细胞的载体

 

NanoSIMS - 结构在第三维

使用NanoSIMS(纳米二次离子质谱法),加上LMD和AFM(原子力显微镜)来获得元件和一个空间分辨率<50nm的样品的同位素组成的一个三维图像进行细菌分析。 的LMD方法证明是有利这里,也:激光产生的过滤器的表面上的网格图形中使用,以标记感兴趣的结构(图2)。 此方法用于在海洋生物学,例如,分析碳和氮固定在太平洋和波罗的海

图。 2:用激光显微切割(LMD)体系催化记者沉积(CARD)-FISH和纳米尺度的二次离子质谱(NanoSIMS)筛选标记分析了相同的过滤器位置。 小盒子图为13 C-结合细胞(红色)的NanoSIMS图像叠加在古菌为细胞的检测CARD-FISH图像。 每个网格的大小是大约50×50微米的带标记的LMD系统

 

LMD在活细胞研究 - 为“蓄意破坏”的方法

徕卡LMD也是在活细胞领域的蜂窝结构,如中心体,微管和膜的蓄意破坏机械特别有用。 例如,细胞膜,可以用激光穿孔,以允许先前完全由膜堵塞的物质的渗透,根据教授 莫妮卡总得从遗传医学和日内瓦大学发展部。 最重要的是,它可以在细胞分裂过程(图3)来操纵细胞的主轴装置。

图。 3:有丝分裂纺锤体消融在野生型单细胞胚胎。 一个C。 线虫 1 -细胞胚胎表达α-微管蛋白融合到绿色荧光蛋白。 有丝分裂纺锤体刚刚之前(a)和激光烧蚀(b)之后。 这两个纺锤体两极消融后分离