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奥林巴斯显微镜:荧光和相衬的组合

2013-10-16  发布者:admin 

光漂白的影响减到最小,荧光显微镜可以不破坏与其他技术相结合的荧光染料,如微分干涉相差(DIC),霍夫曼调制对比度(HMC),传送暗场照明,相位相反的。

fluorophase

我们的想法是找到一个感兴趣的具体领域使用非破坏性的对比度增强技术,然后在一个标本,没有搬迁的标本,在显微镜切换荧光模式。这种类型的一个典型的实验的结果示于图1。图1(a)示出了使用相位对比光学成像的3T3成纤维细胞的单层组织培养。细胞行成立由美国国立卫生行瑞士小鼠胚胎细胞,这是高度接触抑制和有用的研究,涉及形成肉瘤病毒和白血病病毒传播。的显微照片,图1(b)中示出的相同的视场,但是这一次成像使用荧光照明(汞蒸气灯和一个奥林巴斯吴过滤器立方体)的细胞染色的荧光染料4',6 - 二脒基-2 - 苯基吲哚(DAPI ),具有最大发射波长在461纳米,这是用来选择性地染色细胞核和染色质的核酸特异性染料。图1(c)示出这两种技术的组合使用,以产生荧光染3T3细胞核的成纤维细胞的细胞膜和细胞器内部的相位对比度的图像叠加在一个美丽的显微照片。此图片是记录一个专门的萤石目标相环的设计允许同时观察荧光和相衬的目标是一致的。

phasefluoro

在图2中示出在显微镜的配置通常利用同时图像标本同时使用相衬和荧光照明。相衬进行使用透射光所提供的钨卤灯的位置连接到显微镜的基础上在一个灯箱。的视场光阑的光通过被反射到台下聚光镜由相位环形空间,并通过适当的尺寸。

 

试样衍射的光的相位板放置在物镜后侧焦点面上面的中间图像平面与试样未衍射的光通过干涉之前首先通过。同时,紫外线灯发出的由水银燃烧器通过一个激励器过滤器,然后由二向色镜反射来自上述检体上。二次发射的荧光通过附加的染色标本的发色基团被捕获的物镜和通过屏障过滤器,对准目镜和/或光电管。此配置可用于图像标本使用的技术(荧光,相位相反)单独或结合使用。