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奥林巴斯显微镜:偏光显微镜对中

2013-10-16  发布者:admin 

在偏振光显微镜中,适当地对应的各种光学和机械部件是一个关键步骤之前必须进行单独的交叉的偏振器之间进行定量分析,或组合使用相位差板和补偿。几个基本元件必须正确地定位相对于显微镜光轴与其他的机械和光学部件。一系列对准下面列出的步骤用于偏振光显微镜普遍使用,并应适用于学生和研究级仪器。

pol micro alignment figure1

在图1中示出的偏振光显微镜的基本光学和机械部件。在最低限度,这些显微镜必须配备两个线性偏振元件。一个偏振片(称为图1中的偏光片)被置于下面的载物台聚光镜内或以下,或覆盖在基显微镜光源出射端口。上面安装物镜后孔径的第二偏振片(称为图1中的分析仪),无论是在物镜转换器插槽内或位于所述框架和所述观测管之间的中间管。许多偏振光显微镜都配有一个带刻度的圆形的载物台,可以通过360度旋转,为快速变化的偏振器和分析器的透射轴相对于试样取向。此外,在偏振光显微镜的目镜应该有一个十字分划板,以确定的光电场的中心和轴。先进的显微镜包括伯特兰透镜锥光观察物镜后孔集中在干扰模式,但这个配件是不是绝对必要的常规观测。最后,偏振光显微镜应该有一个附件插槽中的物镜转换器或中间管可以插入到相位差板或补偿双折射标本进行定量分析。

 

偏光显微镜对准程序

在偏光显微镜对应的第一步是建立适当的的科勒照明与偏振器和分析器的光学路径中删除。在载物台上放置一个明场(染色)标本,并观察位置旋转10倍的物镜。聚焦样本的物镜和视场光阑光圈到最小设置。带部分闭合的视场光阑作为试件在同一平面上,通过调节聚光镜高度成为大家关注的焦点。使用聚光镜定心螺丝平移图像视场光阑光圈开目镜十字线的中心,然后打开隔膜,直到叶子外面视。

 

之前插入偏光器和分析仪,360度圆形旋转载物台应该集中到10倍的物镜,使标本将保持在视场的正中心,当他们正在旋转。的载物台物镜为中心,也是一个重要的步骤,用于定量分析的双折射和光程差。甲大部分的圆形的显微镜载物台枢轴三个可调的标签,一个在前面的载物台。正确定位和其他两个等距隔开在120度的角度的后部附近的载物台。该载物台可分钟调整到后枢轴销为中心转动中心螺钉。首先通过一个小的圆形功能定位在一个区域没有其他分心的结构就比较简单了明场标本。接下来,重新定位所选择的特征目镜十字线中的视场的中心(参见图2a))。旋转180度的载物台,通过目镜十字线的垂直(图2b))的一个重叠的,直到中心的试样功能。使用枢轴螺丝,搬迁标本特征的距离大约有一半的十字中心(图2c))。最后,移动样品特征的十字线中心(图2a)),重复的排列顺序。经过几个周期后,试样的特征应在视场的中心,作为载物台旋转。

pol micro alignment figure2

载物台已经围绕相对于显微镜的光学轴与安装在光学火车10倍的物镜,其他物镜4倍,20倍,40倍,100倍)应依次为中心的载物台。显微镜有定心的物镜包含一对艾伦(或类似的驱动器)物镜转换器的固定螺丝,翻译的目的在其座位侧面。每个物镜可以使用上面描述的过程为圆形的载物台,通过使用由生产商的客观的定心工具中心。准确的定心的载物台和所有物镜是至关重要的偏振光进行定量分析,并在载物台上旋转的视场中的特定功能,避免了运营商失去。完成定心程序后,审查的步骤,以确保在显微镜上的所有的物镜都准确地集中,然后再继续。

 

建立科勒照明和定心的显微镜载物台和物镜是很容易在明视场模式下完成的(但也可以进行与在偏振光模式的双折射的试样,如有必要)。要继续进行对应的偏振分量,安装在聚光镜或在显微镜的基础上在光源出射口的壳体的固定或可旋转的偏振元件。许多偏振光显微镜都配有一个固定的偏振片具有发送振动轴面向东 西,或左到右站在前面的显微镜时。其他显微镜,可旋转180度或360度的偏振器,并经常被安装到的帧,以渐进的取值范围为190度的增量。确保偏振片正确固定到位,无论是永久固定到其持有人或放置在零的位置。必须被设置为在该步骤中的东 西的方向的偏振器传输的振动轴。

 

将分析仪显微镜物镜转换器或中间管。几乎所有的研究级偏光显微镜分析仪安装在一个矩形框,使元件的旋转通过180度或360度的旋转。学生显微镜通常有一个固定的分析仪(以及作为一个固定的偏振器),以减轻交叉偏振器对应。旋转分析仪,同时检查双折射标本在载物台上用10倍的物镜。当分析仪和偏振器的透射轴交叉在一个90度的角度,最大的检体的双折射(相当于试件最大亮度)应观察到一个非常黑暗的背景上(被称为一个条件,最大消光)。在正交偏振光照明,振动分析仪轴应该是面向南北或前回,而站在前面的显微镜。最大的灭绝只能完成一个关键的评估,同时通过显微镜目镜观察的背景强度。请记住,在这一点上,最大的灭绝只表示偏振器交叉,但不保证其传输轴是完全面向东,西和北南。在下一步骤中处理后一方面。

pol micro alignment figure3

偏振器和分析器轴对准的校准,可以通过以下两种方法之一。许多制造商提供了他们的研究级显微镜偏振光显微镜定位板协助对准正交偏光。这些板块中含有一个完美切割的矩形薄板双折射晶体具有光轴的晶体的长边平行(见图3)。晶体安装平载玻片上,专为使用圆偏振光显微镜载物台。当长轴晶体取向在45度角的偏振器和分析器传输的方位角(图图3a)),最大的双折射在偏振光下观察。向偏振器轴旋转的晶体逐渐降低双折射性的水平(图3b)),直到它被消除时,长轴方向是完全平行的偏振片透射方位(水平目镜十字线,请参阅图3c)) 。

 

在这一点上,液晶的双折射是完全熄灭,应该是从背景难以区分。需要注意的是晶体的轮廓在图3c)是人工的,并且包括仅用于说明的长轴平行于偏振器的方位角。如果偏光器和分析仪无法准确定位,在东西和南北方向(分别),然后晶体长轴平行目镜十字线时完全熄灭的双折射。在这种情况下,晶体的长轴旋转,直到它是平行于水平的显微镜的十字准线,然后直到在目镜中观察到最低双折射旋转偏振器。接下来,旋转晶体双折射仪直至完全熄灭。

 

如果伯特兰透镜的调焦望远镜有偏光显微镜,对应的偏振器和分析器发送方位角使用这些光学元件中的其中一个时,可以执行。没有载物台上的一个标本,交叉偏振器,并插入目镜望远镜观测管或摆动伯特兰透镜的光学通路。聚焦望远镜或客观上伯特兰透镜后孔。一个黑暗的偏振交叉可以观察到明亮的区域侧翼的怀抱十字架上,这应该是垂直和水平方向最大灭绝(图4a))。在大多数情况下,水平和垂直分量的偏振交叉场中心的宽和窄的周边。

pol micro alignment figure4

偏振交叉的几何形状源于在聚光镜和客观的球面透镜表面的去极化作用,并可能会发生变化的大小和形状取决于透镜系统质量(株减少或消除)。然而,在大多数显微镜偏振交叉存在是正常的,一般不能被认为是一个工件。交叉应该集中在视(目镜十字线叠加时)出现在南北和东西方向完全一致。如果这不是的情况下(图4c)中示出),偏振器和分析器应该旋转的组合,直到达到正确的方向。如上所讨论的,完美的偏振交叉对齐(因此,偏振片)的透射轴在零摄氏度是必不可少的补偿器中的光学路径的相位差板或带或不带进行定量测量的双折射方位角。偏振交叉引用校准也是有用的,如果在山上一个固定的偏振片或分析仪偏离。

 

偏光显微镜对应的最后一步是调整聚光镜孔径光阑,所以偏振交叉明亮的外部区域是可见的物镜孔径的边缘被阻止。图4b)示出了适当调整的聚光镜膜片。此步骤显着提高的显微镜光学系统的消光系数,在无畸变模式(没有伯特兰透镜的调焦望远镜)观察时,该字段将出现最大暗。后在显微镜已对齐和校准的偏振轴,它是双折射标本进行定量分析做好准备。



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