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奥林巴斯显微镜:纤维的FISH(荧光原位杂交)

2013-10-16  发布者:admin 

这个术语是指纤维的FISH的普遍做法进行准备延长染色质纤维的荧光原位杂交(FISH)。映射还通过进行FISH调查,在染色体上的DNA片段,在几百万个碱基对的距离之内的信号彼此由于多方面的结构在中期染色体的DNA链是无法区分的。染色体信号的分辨率提高了,如果之前使用它们进步充分冷凝。我们可以做些什么,当我们要映射多个相邻的DNA克隆吗?创建地图规模的一个碱基对整个基因组DNA序列的特性,将解决这个问题,但是是非常耗时的。

fish figure1

人类基因组的计算包含30,000-100,000基因,也就是说,1,200-4,000平均每条染色体基因。10-15千碱基对的平均大小排队间隔40-45千碱基对的DNA链的基因。需要新的程序,以便产生包含这些基因的DNA片段的详细地图。

以下讨论两种机制来克服的分辨率限制使用时遇到的FISH中期染色体。段映射下有一万个碱基对(Mbps)的分辨率可通过使用拉伸染色质(DNA)纤维。

 

 

映射在一万个基对(Mbps)的分辨率 

· FISH上相间核 -可以创建使用间期核染色质纤维延伸到细胞核的高分辨率地图,因为他们更伸展时相比,在中期染色体(参见图1)。本程序是可用于映射在分辨率为50-500千碱基对的DNA克隆,但其准确性有所减少,因为染色质纤维的延伸度各不相同。

· 扩展的染色质纤维的制备 - FISH检测信号,较高的分辨率的方法,得到,通过人为延伸的DNA杂交(图1)之前,在载玻片上的染色质纤维。 

 

纤维的FISH过程 

· 细胞分散在载玻片上,空气干燥。

· 洗涤剂(曲拉通X-100)在密闭容器中,在载玻片上的细胞裂解。

· 染色质纤维的高度时,它慢慢地从容器中取出的载玻片。

· 的制备用乙醇固定。

· 上面的距离为5-700千碱基对的高的分辨率FISH成为可能。

· 探针进行杂交后的标准程序。

目前用于纤维的FISH命令了一系列从染色体克隆的DNA片段,并估计这些克隆之间的距离。然而,仍然必须进行检查DNA链的亚微观层面更多的细节。亚显微测量的难度使得跟踪和距离测量不清楚。目前的研究正在探索潜在的方法可同时检测信号和DNA链。扫描探针显微镜是一种很有前途的候选人。