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徕卡显微镜:激光显微切割的原理

2013-10-16  发布者:admin 

组织学和生物样本中的异质性,往往需要在分析之前,可以进行从周围组织中的具体的单个细胞或细胞群体的隔离。激光显微切割是一种高选择性的样品制备方法,DNA,RNA和蛋白质分析。它是精确的分离技术,用聚焦的激光束的样品和组织的显微镜操控。

 

激光显微切割的原则

要进行显微切割,直立或倒置显微镜的激光被耦合到。选定的区域或什至是单个细胞,然后通过移动聚焦激光束沿其轮廓上切。此过程保证温柔试样的处理 - 特别是,它不传输任何热的试样 - 完全相同,并提供分析所需的材料,是。

 

dissectate然后输送到收集装置中的许多不同的方式。解剖组织,具体取决于所使用的系统下降到反应容器中(徕卡微LMD系统)在重力的作用,被弹射的反应容器(PALM系统中)对在重力的作用进入或间接地除去用膜覆盖样品(大角星和MMI系统)。徕卡LMD和Palm系统也可以用于激光显微操作,例如通过削减在细胞分裂过程中纺锤体纤维。

 

激光显微切割是一个既定的大量的应用,主要是在分子生物学,特别是核酸研究,神经科学,发育生物学,癌症研究,取证,蛋白质组学,植物研究,切割细胞培养和单细胞隔离的方法。激光显微切割甚至用于气候研究,特别是对研究树木的年轮。

LMD_principle

图 1:激光显微切割(徕卡显微系统LMD系统)原理。第1步:定义感兴趣的区域。第2步:激光束沿切割线的光学操纵。步骤3:标本采集的严重性。

 

非接触式激光显微切割的方法和技术

激光显微切割提供精确和污染的解决方案,为单细胞或组织的分离和筛选。组织样本可以被嵌入,根据常规方法制备的切片,染色。石蜡切片,冰冻切片,涂片制剂,染色体标本和细胞培养都适合激光显微切割。解剖选定的区域绘制在电脑屏幕上,并用激光束从周围组织中自动分离。荧光标记也可以使用特殊的滤光块的激光传输的全方位解剖标本。该dissectate然后立即输送到收集装置(以不同的方式,根据该系统的制造商)做进一步的检查。

 

有不同的激光显微切割技术。PALM系统,例如,在一个固定的激光束移动的试样。在这里,所选择的区域被切去从周围组织中,由一个单一的激光脉冲被激活之后,非接触式运输。所选择的组织被提升从检体滑动,弹射到一个集合中的移动设备对在重力的作用。  

 

在重力的作用是选择徕卡系统的方法。在这里,样品被固定,并且在它被移动的激光束。这样便于观看的样品,落入收集装置和dissectate单独受力的重心。切削过程中的精确度是光耦合到所选择的倍率。倍率越高,自动导致更精细的步长宽度的激光束和其运动是相同的程度减少。在这种情况下,没有其他的工作步骤是必需的。不仅是单个细胞,而且较大的区域可以通过在一个单一切除。尽管转移dissectate收集装置的不同的方法,但没有接触或污染的风险。

 

然而,其他一些非接触的方法也可用于激光显微切割(大角星,MMI)。

Grafik_Ablation

图 2:激光显微切割试样制备过程到analyis。

 

AVC

图 3A:脑第12微米,在解剖前,物镜63X,甲苯胺蓝染色。AVC +形状的检测。所选的形状是在选定的检测特性。


AVC_c

图 3B:解剖后



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