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尼康显微镜:荧光激发块的分类

2013-10-16  发布者:admin 

落射荧光的干扰和吸收滤色镜组合被安置在滤色镜立方体(或光学块),并包括激发滤光片,二色性分束器(通常称为反光镜),和光栅(或发射)的滤色镜,如在图1中示出(一)。使用本指南中选择适当的滤色镜设置为广角荧光显微镜调查所用的发色团的激发和发射光谱特性相匹配。作为一个例子,图1b)给出一个典型的高性能带通发射蓝光激发滤色镜组合的光谱。尼康荧光滤光器组合中所提供窄,中,宽的通带激发版本与相应的发射滤色镜可与任何带通或长波光谱特性。

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紫外线激发 -尼康紫外线激发荧光滤色镜组合包括四个仔细平衡的组合,包含着带通或长波发射(光栅滤色镜能够选择性地隔离通过一个窄或宽的区域,蓝色,绿色和红色可见光的荧光波长的光。这些滤色镜的组合涵盖的激发波长范围在330380纳米的带通带宽度公司1040,和50纳米之间。三组合采用相同的二色镜,而第四套有一个反射镜具有较低的切配合其较窄的激发带的波长。紫外线滤色镜集包含长通或单通发射滤波器。

 

激发 -尼康紫激发荧光滤色镜系列包括三种组合包含任带通或长波辐射(光栅滤色镜能够通过一个窄或宽的区域,蓝色,绿色和红色的波长选择性地隔离荧光。这些组合覆盖的激发波长范围在379-420纳米的带通宽度的档案1022,和40纳米之间。了两种组合采用相同的二色镜,而第三组有较低的波长截止,而其更短的波长的激发带重合的镜像。

 

蓝紫激发 -尼康蓝紫激发荧光滤色镜组合包括四个组合,其中包括无论是带通或长波发射滤波器(光栅)能够选择性地隔离通过一个窄或宽的区域,青色,绿色荧光,红色波长。这些互补滤波器组涵盖激发波长介于400-446纳米带通宽度型材1020,和40纳米。三组合采用相同的二色镜,而第四组具有较高的波长上(5纳米)切断,以符合其的其他组件具有镜面。

 

蓝色激发 -尼康蓝色激发荧光滤波器补充包括六个平衡组合,包含着带通或长波辐射(光栅滤色镜能够选择性地隔离通过一个窄或宽的频带的绿色,黄色,红色荧光,和近红外光谱区域。这些滤色镜组覆盖的激发波长范围在420495纳米的带通宽度的档案203040,和70纳米之间。五组合采用相同的双色镜,,而第六集切断较低的波长上增加采集的信号有一个镜子。尼康蓝色激发滤光片组合的带通滤波器阻隔滤色镜都有谱宽为40纳米。其中一个滤色镜B-3A)被设计为可以采用钨卤素灯照明。

 

绿色激发 -尼康绿色激发荧光滤色镜组合系列包括6块无论是单通或长波发射(光栅滤色镜能够选择性地隔离荧光黄色窄或宽的频带内,橙色,红色和近红外光谱区域。这些滤色镜的组合包括510560纳米的带通带宽度公司102530,和50纳米(窄,中,宽激发带)的激发波长之间的范围。三组合采用相同的二色镜(565纳米),而其他三个波长具有较高的切割值(570575纳米)上的反射镜。两个六尼康绿色激发滤光片设置结合带通光栅带宽的6075纳米的滤色镜

 

黄色激发 -黄色激发荧光滤色镜从尼康组合包括两个平衡集单带通滤波器(光栅)能够选择性地隔离荧光的橙红色光谱区域内。这些互补的滤色镜组合包括与通带的宽度在4055纳米的532587纳米的激发波长范围内。这两种组合使用相同的长通双色镜(595纳米切)。两个尼康黄色激发滤光片设置纳入通光栅滤色镜带宽为6075纳米..

 

激发 -尼康红色激发荧光滤色镜组合类别包括单块集成了一个带通滤色镜能够选择性地隔离发生在深红色荧光近红外光谱区的发射(光栅)。在700纳米的阻挡滤波器的通带的中心,与带宽为75纳米(663738纳米)。60纳米宽的激发带,包括橙色和红色波长涵盖590650纳米的光谱范围。Cy5的的HYQ组合采用了长通双色镜,具有波长为660纳米,这是高于10纳米的激发带通截止的切口。

 

黄色荧光蛋白(YFP激发 -尼康黄色荧光蛋白的荧光滤色镜类包括一个单一的高性能均衡的组合,有效地延长了荧光蛋白检测波长较长的增强型绿色荧光蛋白(GFP)的滤色镜设置所提供的功能黄色色变异的GFPYFP EYFP)的。YFP HYQ滤色镜组合采用相对较窄的通带的激发和发射(光栅)滤波器,其目的是为了符合特定的光谱特性的增强型黄色荧光蛋白,使荧光从YFP衍生物排放分别评估其他荧光蛋白质。

 

双频激发 -尼康双波段荧光滤色镜组合包括三个仔细平衡的组合,包含双通的激发和发射滤波器(光栅),被纳入一个单一的元素,能够选择性地隔离同时从两个荧光基团的荧光。滤色镜组中的每一个是与特定的荧光染料对为获得最佳性能而设计的,尽管它们与具有类似的吸收光谱和发射光谱的荧光探针的替代对同样有效。利用精确的波段选择,陡峭的带通反射和透射区域,多激发和发射信号之间的转换是分开以最小的交叉干扰。

 

三频激发 -三的激发带荧光尼康提供的滤色镜包括两个平衡块包含三重通激发和发射(光栅滤色镜能够选择性地隔离同时从三个荧光团的荧光发射。每一个滤色镜组是专为最佳性能具有特定的的三个荧光染料,虽然他们是同样有效的与的备用探头组合具有类似的吸收光谱和发射光谱。利用精确的波段选择,与陡峭的带通反射和透射区域,多激发和发射信号之间的转换是分开的与最小interference.三立方体。

 

HYQ立方体 - HYQ尼康荧光滤色镜组合组包括四个仔细平衡高性能集,其中包括带通发射滤波器(光栅)在有限的选择性分离荧光波长范围。每个HYQ滤色镜设置的命名反映了荧光染料的名称,它主要是设计,但在其各自的激发范围之内,可应用的每一种组合的各种适当的荧光染料。

 

尼康荧光滤光片设置总表

尼康所采用的滤色镜的命名源于条款可以追溯到20世纪90年代初的混合物。当时,所有的尼康互补滤波器组合使用硬涂层溅射技术,但许多目前可用的滤色镜利用新型柔软的涂层方法生产。虽然软大衣更容易受到湿度和热降解,且必须更仔细地处理比硬涂层滤色镜,他们表现出更高的阻挡光密度值,,微调特定波长频带,并提供更大的方便。了解尼康滤色镜组合代码命名规则提供了一种机制,迅速 ​​确定是否特定的一组特定的荧光将充分履行。

 

尼康专有的字母数字滤波器的指定代码的第一个字母表示的波长的激发光谱区域(例如,UVVB,和g,这是简单的缩写紫外线,紫色,蓝色,绿色,分别)。激发后的代码的数量涉及激发滤波器的通带的宽度:1中和宽的频带激发的窄频带激发2,和3很宽的频带激发。最后,一个或多个字母的激发带通大小号码标识的光栅滤色镜的特点。代码字母à表示一个标准的长通光栅滤色镜以最低的截止波长,而指定较高的临界波长值一个长波发射滤波器的。带通发射滤波器中带有字母的ê(指增强),表明其优越的性能方面,以消除交叉。E / C滤波器是柔软的毛发干扰组合设计特异性探针,如DAPIFITCTRITC,州和得克萨斯州红获得最佳性能。

 

紫外光激发

UV-2E / C - UV-2E / C滤波器组合设计作为一个尖锐的紫外荧光截止滤波器块。滤色镜是用于产生高信/噪比的软涂层类型。利用此组合的窄带带通光栅滤色镜的设计显着地减少或完全消除绿色和红色的可见光的波长。

UV-1A - UV-1A组合被设计成具有窄的激发带通(只利用的汞光谱线)和二色镜的通带窄,最大限度地减少自体荧光和光漂白的一个滤色镜块,用于紫外荧光。

UV-2A - UV-2A滤色镜的组合被设计成一个标准的滤色镜块,用于紫外荧光是最亮的紫外线滤色镜,设置在Nikon调色板。

UV-2B - UV-2B组合被设计作为一个通用的滤色镜块,提供更暗的背景和更好的对比度比UV-2A滤色镜的组合的紫外荧光。

 

激发

V-1A - V-1A滤色镜的组合被设计作为一个滤色镜块具有窄的带通区域,以减少自发荧光的紫色荧光激发。长通的排放滤色镜,可检测的荧光染料的波长范围很广。

V-2A - V-2A组合作为一个标准的紫色荧光滤色镜块具有最大程度的通用性而设计的。随着介质的激发带通和长波发射滤波器,产生的图像是最亮的尼康紫滤波器组。

蓝色荧光蛋白(BFP -BFP滤波器块结合了一个狭窄的激发带,发射用一个带通滤波器限制自体荧光,以及排除来自红色和绿色的荧光团的发射检测。这种滤色镜的组合,是优秀的成像蓝色荧光蛋白的衍生物。

 

蓝紫激发

BV-1A - BV-1A滤色镜的组合被设计作为一个滤色镜块的蓝紫色荧光激发具有很窄的带宽,以尽量减少试样的自体荧光。长通的排放滤色镜,可检测的荧光染料的波长范围很广。

BV-2A - BV-2A组合设计为标准的蓝紫色荧光滤块。随着中激发滤光片带通和长波发射滤波器,产生的图像与这个组合是最亮的尼康蓝紫滤波器组。

BV-2B - BV-2B组合被设计成蓝紫色荧光的滤色镜块,提供了一个比较暗的背景色和更高的对比度比标准的BV-2A滤色镜的组合。

CFP(青色荧光蛋白) - CFP滤波器模块结合了激发带宽窄通发射滤波器来限制以及自发荧光排除检测红,黄,和许多绿色发光的荧光染料。

 

蓝光激发

B-1A - B-1A滤波器组合设计与窄激发通带,以减少自体荧光漂白。阻的长通滤波器(发射)是能够发送信号,从绿色,黄色,橙色和红色的荧光基团,具有显着的吸收在上部蓝色波长区域对应的激发带通窗口。

B-2A - B-2A滤色镜组合尼康蓝光激发组是标准的滤色镜设置。它的设计采用了宽激发带通相比,B-1A结合的荧光团,以提供一个扩大的吸收窗口的设置也有较低的二色镜和阻挡滤波器的波长,产生增强的图像的亮度相比,-1A滤色镜设置。

B-3A - B-3A滤色镜的组合使用的相同的二色镜和长通发射滤波器作为B-1A集,但采用了一个很宽的激发带,使得它适用于钨卤素灯照明。这种结合可实现的一个显着量的从绿色,黄色,橙色和红色的荧光基团,在蓝色波长区域具有吸收带的信号的传输。

B-1E - B-1E滤色镜的组合的三组中的蓝色荧光激发系列,利用带通,而不是长波通,阻挡滤色镜的主要区别在激发带的宽度。阻带通滤波器组中的每一个提供的性能适用于标记的异硫氰酸荧光素(FITC)(绿色发光)的成像标本,而阻挡黄色,橙色,红色发射。B-1E组合使用一个窄带的带通激发滤光片结合带通发射滤波器(阻挡)。

B-2E - B-2E滤色镜的组合,采用了广泛的激发带通,延伸20纳米的低波长比激发带的B-1E集。二色镜和带通光栅滤色镜的规格是相同的B-1EB-2E滤波器组合。

B-2E / C - B-2E / C滤色镜的组合采用一个中等宽度的激发带,连同一个稍微降低的发射带通波长区域相比,B-1EB-2E集。的性能进行了优化,同时提供改进的排除黄色到红色的波长检测多个标记实验中流行使用的荧光团的数量。

 

绿色激发

G-1A - 绿色波长激发G-1A滤波器组合是一个狭窄的激发带通设计,以减少自体荧光,并尽量减少试样的辐射暴露。阻的长通滤波器(发射)是能够发送信号,从黄色,橙色,红色发光的荧光基团,在中央的绿色波长区域中有显着的吸收。

G-1B - G-1B滤色镜组合也有类似的G-1A集组件配置文件,将狭窄的激发带通,以减少自体荧光和试件破坏,但不同的双色镜和发射滤波器切断波长。上较长的波长的发射滤波器的移位产生的图像显示偏红由于增加阻塞的黄色发射。

G-2A - G-2A滤色镜组合配置为标准的绿色滤色镜块,具有广泛的应用到绿色波长激活了大量的荧光团激发通带。长波发射滤波器允许检测的所有荧光波长较长的比黄色的光谱区域。

G-2B - G-2B滤色镜组合设计作为G-2A滤波器块具有相同的激发特性。然而,更高的双色镜和发射滤波器截止波长,G-2B组产生的图像具有较深的背景和颜色移朝红。

G-2E / C - G-2E / C滤波器组合设计多个标记实验中所使用的一些流行的荧光探针具有最佳的性能。一条狭窄的激发带通提供选择性激发,而带通发射滤波器减少干扰发射红光和近红外荧光团。

CY3 HYQ - Cy3绿色激发滤光片组合配置类似G-2E / C组。然而,具有更广泛的激发通带和宽的发射带通,包括较低的波长,通过Cy3标记的滤色镜块,产生的图像是明亮一些反映更黄的光谱区域发射的检测。

 

激发

Y-2E / C - Y-2E / C滤色镜的组合为黄色波长激发的设计作为一个专业的滤色镜设置为使用与得克萨斯红和CY3.5,虽然激发带宽跨越黄色波长(重叠的部分绿色区域),设定可以利用与其他荧光染料的范围。阻带通滤波器的传输信号从橙色和橙红色发光的荧光基团,同时消除最红和近红外发射。

德克萨斯红HYQ - 德克萨斯红HYQ滤色镜组合Y-2E / C组也有类似的零件外形,而是更广泛的激发和发射带通窗口,允许它来传输更多的能量,并产生较亮的图像。由此产生的图像也反映了额外的红色荧光信号,由于红色光谱区域中的较长的波长的发射滤波器的通带的延伸。

 

激发

Cy5HYQ - Cy5HYQ红色波长激发的滤色镜的组合的目的是提供高能量的激发的荧光Cy5标记的宽的激发范围(黄-橙色〜红色),虽然可以设置为使用多种荧光染料。陡峭的滤波器的反射和透射区之间的转换使能维持在与高亮度电平的宽通带的使用产生的组合信号分离。阻带通滤波器的传输信号从远红外到近红外的波长范围内是最有效的使用的红外滤色镜的电子探测器,如光电倍增管和CCD相机没有检测到。

 

双频激发

DAPI-FITC - DAPI-FITC滤色镜的组合被设计成用于同时检测排放物荧光染料DAPIFITC,或其他的荧光探针具有相似的光谱特征的配对。双窄的激发和发射频段对应相应的蓝色发射,耦合到绿色发光的蓝色激发紫光激发特定区域。

FITC-TRITC - FITC-TRITC滤波器的组合是专为同时检测荧光染料FITCTRITC,或探头对光谱相似排放。激发和发射滤光片带通滤波器允许两个信号通道,一个蓝色的激发和绿色发射对应于特定的窄的区域,另一个绿色的激发和发射橙红色。

FITC-德克萨斯红 - FITC-德克萨斯红滤色镜的组合的设计相比,具有稍微不同的带通区域为蓝色的激发和绿色发射的FITC-TRITC集,以便更有效地激发FITC。这些变化符合稍高的波长范围为得克萨斯红色(绿色激发红光发射)频段。多个带通区域提供最佳的检测,以最小的串扰,同时FITC和得克萨斯州红或荧光光谱相似对可视化。

 

三频激发

DAPI-FITCTRITC - DAPI-FITC-TRITC滤色镜的组合被设计成用于同时检测排放物的荧光染料DAPIFITCTRITC或其他具有相似的光谱特性的探针的组合,。三个狭窄的激发和发射频段对应相应的蓝色发射,耦合到绿色发光的蓝色光激发下,绿橙红色发射激发紫光激发特定区域。

DAPI-FITC-得克萨斯红 - DAPI-FITC得克萨斯红滤色镜的组合设计紫罗兰激发稍微不同的通带区域-蓝色的发光,蓝色激发-绿光发射,当较标准组DAPI-FITCTRITC。该设计的目的是,以更好地符合具有较高的激发和发射波长所需的德克萨斯红,相对值TRITC。多个带通区域提供最佳的检测,以最小的交叉和噪声,同时可视化的DAPIFITC,和得克萨斯红或荧光光谱相似组合。

 

HYQ滤色镜组合

TRITC HYQ - TRITC的的HYQ滤色镜组合绿色波长激发TRITCDII如荧光染料,以提高性能。一些绿色激发载通常使用在本申请中,扩大激发通带红移的二色镜切向这些荧光团的较高的信号电平,并允许改进的检测红色荧光蛋白的荧光蛋白变体和远红荧光的比较蛋白HcRed

 

CY3 HYQ - Cy3HYQ绿色激发滤光片组合的G-2E / C组也有类似的零件外形,虽然它产生了更多的激发和发射能量,通过扩大通带窗户。此外,发射通带延伸到较低的波长(入黄),从而在两个明亮的图像和黄橙色的色调偏向。这是推荐的滤色镜的组合,用于检测的花青Cy3标记的荧光探针,尤其是在多标签技术,它减少从远红光和近红外荧光团发射的干扰。

 

得克萨斯红HYQ - 得克萨斯红HYQ滤色镜组合使用的荧光探针得克萨斯红色和CY3.5优化,具有更广泛的激发和发射通带比同类Y-2E / C组。由于由此产生的更高的信号电平,发射通带向长波长延伸,相对于Y-2E / C设定,这样的组合产生更明亮,更偏红色调的图像。得克萨斯红的HYQ组合提供改进的性能超出了上限的Y-2E / C发射带波长发射的探针,同时限制在深红光和近红外荧光团发射的干扰。

 

Cy5HYQ - CY5 HYQ滤色镜组合是唯一的尼康专为高能量的红色波长的激发,虽然使用荧光Cy5的优化,宽阔的橙黄色,红色的激发范围是适合采用各种应用荧光染料。产生的荧光在远红外到近红外波长的发射滤波器的通带相对应的,主要是对人眼不可见的,最有效的检测需要使用的光电倍增管或CCD摄像机。宽带通滤波器的地区,加上陡峭的剪切和切断过渡,保持最大的信号分离和信号噪声比,HYQ滤波器系列的特点。

 

荧光蛋白滤色镜组合

赋予GFP长波发射(FGPR-LP - 赋予GFP长波发射滤色镜的组合,是一种长通版本赋予GFP带通滤波器的设置和设计赋予杜克大学博士Sharyn的。此滤色镜的设置是非常有用的用于荧光的研究利用wtGFPEGFP。随着这个系列的其他滤色镜,集设计,增加二次荧光强度(亮度)没有相应增加噪音水平。通带越陡,所建立的干扰腔的数目增加的激发和发射滤光片,允许滤波器的光谱之间的接近。由此产生更广泛和更陡滤色镜光谱允许的设置,以提供更多的激发和捕获更多的荧光强度。

 

赋予GFP带通发射(FGPR-BP - 赋予GFP带通发射(FGPR-BP滤色镜组合是一个带通版本赋予GFP长通滤光片设置Sharyn博士设计赋予杜克大学。此滤色镜设置为利用wtGFPEGFP的荧光研究是有用的,是分布最广的GFP滤色镜集。

 

活塞GFP带通发射 - 活塞GFP带通发射滤色镜组合是范德比尔特大学博士大卫活塞设计一个带通滤波器。发射滤波器具有窄带通,是有用的,同时避免超过540纳米波长的自发荧光定量EGFP赋予绿色荧光蛋白的荧光。

 

黄色荧光蛋白带通发射(YFP HYQ -尼康黄色荧光蛋白YFP HYQ滤色镜集设计,在一条狭窄的(20纳米)波长在蓝绿光谱区域中带传输激发照明,再加上绿色,黄色发射检测30纳米通区域内。该块是优化成像YFP,青色荧光蛋白的双染色技术,同时保持歧视。