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显微镜暗视场观察法

2013-10-16  发布者:admin 

暗视场观察法,可以观看通常的动植物组织切片、血液图片、硅藻片。在观察透明的活体标本方面,如含有细菌的液体更显出其优越性。值得指出的是,它还能观察到小于物镜分辨率的微粒。这些
微粒在黑暗的背景中以亮点形式出现,使观察者能观察到它们的存在和移动,有人称此为超显微术。阿贝聚光镜

要实现暗场效应,最简单的方法是在普通的阿贝聚光镜下方插入一块环形光阑,使照明的最小孔径角大于物镜数值孔径即可。

暗场观察法的光学原理图左图为暗场观察法的光学原理图。
图中:
1. 环形光阑
2. 阿贝聚光镜
3. 物镜
集光镜射出的光束,经暗场环形光阑后以环状光束射向阿贝聚光镜。然后以环状的光锥照明标本,光锥最小角度即照明孔径角,它必须大于物镜的数值孔径。

 

干燥型暗场聚光镜如果标本片内无任何东西,那么照明光线不可能进入物镜,视场内漆黑一片。反之,标本片内存在某些东西如细菌等微粒,那么由于光的衍射与散射作用,这些光线就进入物镜并成象,视场内将看到漆黑的背景中存在许多明亮的标本象。用插片方式实现简易暗场,价格低廉,但只能与放大率≤40x 的物镜配合使用。由于阿贝聚光镜内的杂散光及色差等因素视场背景难达到完全漆黑的程度。

 

干燥型暗场聚光镜要达到理想的暗场效果,最好采用专用的暗场聚光镜。这种聚光镜有干燥型、浸液型之分。
干燥型暗场聚光镜有几种形式,它们的共同点是在一个透镜上有多个球面。其中两个是反射面,其余面是折射面。光束经过它们后,最小照明孔径约在0.75~0.78 之间。因此,与倍率≤40 倍物镜匹配可以获得很好的效果。左中图为二种干燥型暗场聚光镜:

 

 

 

浸液型暗场聚光镜浸液型暗场聚光镜由两个相同材料的透镜胶合而成。加上浸油后,最小照明孔径约1.22,适合与100 倍油浸物镜配合使用。注意,物镜中必须带有可变孔径光阑,能减少物镜的数值孔径。否则,部分照明光束将直接进入物镜而破坏暗场效果。其光学原理如左下图。

 

浸液型暗场聚光镜

 

 

 

 

 

 

 

 

注意:
- 浸液型暗场聚光镜使用时必须在载玻片与聚光镜间滴上浸油。
- 这种聚光镜还能与干燥型物镜配合使用。特别是高倍率的干燥型物镜,能取得很好的效率。其缺点是,照明范围较小。因此与低倍率物镜,特别是4 倍物镜,只能在视场中心部分可以进行暗场观察,而四周无光线照明,呈现一片黑暗。

暗场效果的好坏与使用时聚光镜的调节有很大关系。举简单暗场调节实例:
- 标本上放置一半透明纸。
- 打开可变孔径光阑,升降带有暗场插片的聚光镜,使半透明的纸上呈现明亮圆形的光斑。
- 调整聚光镜对中螺钉,使照明光轴与物镜光轴重合,此时视场背景应均匀黑暗。



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