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显微镜摄影的基本步骤

2013-10-16  发布者:admin 

一. 显微摄影的基础知识

显微镜摄影
1 显微摄影装置的放大倍率
照片的放大倍率,决定于照相目镜的型号和显微摄影装置的投影长度。如前所述,目前光学显微镜的光路系统是万能无限远光学校正系统,与以前的有限远光学校正系统有了很大的改进。所以两种系统的照片放大倍率计算方法不同。
(1)
有限远光学校正系统: 照片总放大倍率=物镜放大倍率X照相目镜放大倍率(没有中间附件时)或 照片总放大倍率=物镜放大倍率X照相目镜放大倍率X中间附件系数(连接有中间附件时)。
(2)
万能无限远光学校正系统: 照片总放大倍率=物镜放大倍率X照相目镜放大倍率(中间附件不影响放大倍率)。
(3)
大版照相:照片总放大倍率=物镜放大倍率X照相目镜放大倍率X 3
照片的总放大倍率是指底片上图象的放大倍率,而不是指底片冲洗到相纸后的放大倍率。
2 物镜与目镜的不同组合,得到的分辨率不同
即使照片的总放大倍率相同,它的分辨率是根据物镜、目镜的不同组合而不同的。在显微摄影时应尽量使用低倍照相目镜与高倍物镜组合,这样能改进底片平面象的分辨率。
3 标本画面的构图
显微摄影时,视场中的标本往往不适合摄影构图,克服这个问题的办法是转动照相机,以使标本成比例得适合构图的要求。但这时要进行操作显微镜来适合摄影构图就更困难了。一般人们乐用的方法是转动载物台,将标本调到画幅理想的构图中。


二. 显微摄影技术

1 工作前的准备
(1)
光路系统的清洁  显微摄影必须保证光路系统的清洁,任何光学部件有了污垢及灰尘,均会影响照片的质量。物镜、目镜及聚光镜等部件,如污垢长期得不到清理,还会引起霉菌的生长,致使不能应用。各部件在擦拭时,只能清理表面,而不应任意拆卸。
(2)
光轴中心的调整  显微摄影时光轴中心的调整是绝对不可忽视的,否则拍出的图象,各部分的感光不匀。关于调整的方法前已述及,这里不予重复。
(3)
其它准备工作  检查镜体与照相系统的安装是否正确;根据被检物体的情况选用何种感光片;如为半自动和全自动照相系统,需调节好相应的按钮。拍摄前需用观察目镜观察,先调好两眼的瞳距,使两个视场的象合而为一,再调节好两眼的屈光度以适应观察者的视力。
2 视场光阑与孔径光阑的应用

视场光阑的作用前已述及, 在观察时根据物镜的倍率不同视场光阑开大或缩小而给予相应的光束面积,以达到镜检的优良效果。在显微摄影时它起着增加和减弱影象反差的作用。当视场光阑开大到一定程度时,照射到被摄物体上的光,即会产生反射与不规则的散射,造成影象反差的损失;当视场光阑收缩到取景框边缘的外方时,图象的反差就得到改善;视场光阑过度的收缩接近取景框,则图象的四角部分将被切去。因此,在显微摄影时,视场光阑的应用是重要的一个因素,应开启到比取景框稍大的位置。
3 人眼屈光度的校正
镜检时,每人眼睛的屈光度不尽都一致,总是存在着一定的差别。当甲看清视场中的图象后,乙来观察时就不一定清晰,这是由于两人眼睛的屈光度有所不同而造成的,这一差别很易解决,只要调节一下微调焦旋钮就很容易使图象清晰。但是在显微摄影时,用这种方法是不能解决的,因为上述是通过改变工作距离的长短来补偿两人的屈光度;而显微摄影则必须使物镜处于它本身的工作距离处,使成象清晰地落在感光片的平面处,才能使感光片得到清晰的图象。往往有这样的经验,在视场中观察到的图象很满意,可拍摄出来的底片则模糊不清,就是这个原因。
显微摄影的调焦方法,必须利用取景侧目镜(聚焦望远镜)或取景目镜,首先进行屈光度的校正,即旋转取景侧目镜或取景目镜上的圆环,使取景框中的双十字线达到最清晰的程度,这时再进行调焦使图象清晰,便可进行曝光。但应指出,应用同一只眼睛调节,不然两眼之间也会存在屈光度的差异。在调节双十字线时,应尽快予以调整,否则长时间的调整,人眼将产生适应性,则不易调得准确,如遇此情况,可远眺前方稍待一段时间后再进行调节。
在使用4X以下物镜时,由于焦深较长,只用取景目镜还会发生调焦的误差,这时可利用聚焦放大镜来克服误差。其方法是将聚焦放大镜放在取景侧目镜或取景目镜上,拧紧固定螺钉,再旋转该镜筒上的圆环,看清双十字线后物象是否同时清晰,如不清晰,再进行调节。在使用10X20X物镜时,当双十字线与图象同时清晰后,用眼环视一下,看双十字线与图象是否有移动现象,如果图象不移动,则说明焦点已对准;如有移动,需用微调重新调节。
4 曝光的补偿


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