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什么是暗视野显微镜?可以看见多小的细胞?

2013-10-16  发布者:admin 

暗视野显微镜(dark field microscope)是光学显微镜的一种,也叫超显微镜ultramicroscope )。暗视野显微镜(dark field microscope)的聚光镜中央有挡光片,使照明光线不直接进人物镜,只允许被标本反射和衍射的光线进入物镜,因而视野的背景是黑的,物体的边缘是亮的。利用这种显微镜能见到小至 4~200nm的微粒子,分辨率可比普通显微镜高50倍。

原理

钩端螺旋体(暗视野映光法)

钩端螺旋体(暗视野映光法)

 

暗视野显微镜是利用丁达尔(Tyndall)光学效应的原理,在普通光学显微镜的结构基础上改造而成的。暗视野聚光器,使光源的中央光束被阻挡。不能由下而上地通过标本进入物镜。从而使光改变途径,倾斜地照射在观察的标本上,标本遇光发生反射或散射,散射的光线投入物镜内, 因而整个视野是黑暗的。   

暗视野显微镜的基本原理是丁达尔效应。当一束光线透过黑暗的房间,从垂直于入射光的方向可以观察到空气里出现的一条光亮的灰尘通路”,这种现象即丁达尔效应。暗视野显微镜在普通的光学显微镜上换装暗视野聚光镜后,由于该聚光器内部抛物面结构的遮挡,照射在待检物体表面的光线不能直接进入物镜和目镜,仅散射光能通过,因而视野是黑暗的。暗视野显微镜由于不将透明光射入直接观察系统,无物体时,视野暗黑,不可能观察到任何物体;当有物体时,以物体衍射回的光与散射光等在暗的背景中明亮可见。在暗视野观察物体,照明光大部分被折回,由于物体(标本)所在的位置结构,厚度不同,光的散射性,折光等都有很大的变化。 

 

结构与改装

  暗视野显微镜基本结构是将普通显微镜光学组加上挡光片。普通显微镜只要聚光器是可以拆卸的,支架的口径适于安装暗视野聚光器,即可改装成暗视野显微镜。在无暗视野聚光器时,可用厚黑纸片制作一个中央遮光板,放在普通显微镜的聚光器下方的滤光片框上,也能得到暗视野效果。挡光片是用来挡住光源中间的光线,让光线只能从周围射入标本,大小约和光圈大小相同。不同倍率用不同的光圈,所以要制作不同的挡光片。 

 

实际应用

  

暗视野显微镜常用来观察未染色的透明样品。这些样品因为具有和周围环境相似的折射率,不易在一般明视野之下看的清楚,于是利用暗视野提高样品本身与背景之间的对比。这种显微镜能见到小至4~200nm的微粒子,只能看到物体的存在、运动和表面特征,不能辨清物体的细微结构。临床上,暗视野显微镜常用于检查苍白的螺旋体。这是一种病原体检查,对早期梅毒的诊断有十分重要的意义。